一种枣子香料.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103555768103555768A(43)申请公布日2014.02.05(21)申请号201310536807.2C12R1/69(2006.01)(22)申请日2013.11.04C12R1/67(2006.01)(71)申请人成都宏亿实业集团有限公司地址610110四川省成都市龙泉驿区洪河镇三桥村九组(72)发明人夏玲杨玉玺林应红刘文平周斌(74)专利代理机构成都中亚专利代理有限公司51126代理人何渊(51)Int.Cl.C12P1/00(2006.01)C12N15/04(2006.01)C12N1/15(2006.01)C11B9/00(2006.01)A24B3/12(2006.01)权利要求书2页权利要求书2页说明书4页说明书4页(54)发明名称一种枣子香料(57)摘要本发明公开了一种枣子生物香料，该香料由枣子酶解、枣子酶解物发酵、枣子发酵液进行回流提取、浓缩制得枣子生物香料。枣子生物香料嗅香为酸甜的枣子果香香气及清爽的糖化香气，能与烟草香协调，增加卷烟的细腻甜润感；温和而留香持久，能够衬托烟叶的自然香味，提高品质和改进烟气吸味；可以起到改善口感、增加卷烟清香气息、减小卷烟刺辣的作用。本技术生产周期短，生产过程简单、可控，适宜规模化生产。本发明模拟天然植物的代谢过程，生产出烟用天然枣子生物香料，生产过程绿色环保，不需使用添加剂或多种溶剂来制备，制得的枣子生物香料安全可靠。CN103555768ACN1035768ACN103555768A权利要求书1/2页1.一种枣子生物香料，其特征在于，该香料由以下制备方法制得：（1）枣子酶解，得枣子酶解物；（2）枣子酶解物发酵，得枣子发酵液；（3）将枣子发酵液进行回流提取、浓缩，得枣子生物香料。2.根据权利要求1所述的枣子生物香料，其特征在于：所述步骤（1）中枣子酶解的方法包括以下步骤：a.取干枣洗净，沥干，用破碎机将枣子破碎，然后将枣子与水按1:4的质量比投料到酶反应器中，开启搅拌、加热；b.调整pH=6-6.5，当温度升至48℃±2℃时，按干枣子重量计，加入0.4%的果胶酶和0.2%的纤维素酶，48℃±2℃下酶解反应5小时；c.酶解完毕，进行巴氏灭菌处理，得枣子酶解物。3.根据权利要求1所述的枣子生物香料，其特征在于：所述步骤（2）中枣子酶解物发酵的方法为，对置于发酵罐中的枣子酶解物接入工程菌一级种子液进行发酵，具体包括以下步骤：a.工程菌的制备：由自然分离的两株菌米曲霉菌和黄曲霉菌通过PEG诱导融合技术，经纯化培养分离得到一株工程菌菌株，具体为：将米曲霉菌经察氏液体培养基在35℃培养48小时后放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集沉降菌体Ⅰ；按沉降菌体Ⅰ与SMM稳定液1：1等量混合并在32℃感受1小时后，再放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集沉降菌体Ⅱ；将沉降菌体Ⅱ与SMM稳定液配成5ml菌悬液；SMM稳定液组成为：蔗糖103g/L，MgCl22.03g/L，溶剂为蒸馏水，pH6.7；取菌悬液1ml+SMM稳定液1ml，用无菌水稀释10万倍，接种在察氏培养基平板上，在32℃培养48h，计其总菌落数，收集菌体，加入3%蜗牛酶1ml，0.2%的MacerozymeR-100.5ml，置于34℃水浴锅中酶解1.5h后放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集原生质体化沉降物，将原生质体化沉降物与SMM稳定液配成5ml菌悬液，用无菌水稀释10万倍，接种于察氏培养基平板上，在32℃培养48h，计数菌落数，得原生质体化后的米曲霉菌；按上述制备原生质体化后的米曲霉菌的方法制得原生质体化后的黄曲霉菌；取原生质体化后的米曲霉菌和黄曲霉菌各1ml，混合后加入1.8ml的PEG4000，SMM稳定液0.2ml，3.68%的CaCl21ml，1%牛清蛋白1ml，在36℃水浴锅中融合30min后以2000r/min转速离心10min，收集沉降融合子；融合子加SMM稳定液5ml，用无菌水稀释10万倍，接种于察氏培养基平板上，在32℃下培养48小时，分离出融合后的新菌落，得到工程菌，并通过液体石蜡密封法保存工程菌；b.工程菌一级种子液的制备液体培养基的配制：硝酸钠0.3%，磷酸氢二钾0.1%，MgSO4·7H2O0.05%，氯化钾0.05%，硫酸亚铁0.001%，蔗糖3%，加蒸馏水到100%，调PH6.7，121℃灭菌15分钟；将液体石蜡保藏的工程菌菌种活化，在无菌室接种到液体培养基中，28-32℃振荡培养48h，制得工程菌一级种子液；c.发酵2CN103555768A权利要求书2/2页将枣子酶解物置于发酵罐中，保持30℃±2℃，调整pH=