生物检测技术及检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103773893103773893A(43)申请公布日2014.05.07(21)申请号201210400321.1(22)申请日2012.10.21(71)申请人叶长国地址271000山东省泰安市泰山区金山路61号(72)发明人不公告发明人(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书3页说明书3页(54)发明名称生物检测技术及检测试剂盒(57)摘要我国已发展成为世界上最大的养殖大国，畜产品产量约占世界的百分之二十五左右，生猪存栏更是达到世界总量的百分之五十八以上。如何准确快速的进行疾病的检测，以便及时采取有效防治和治疗措施，减少疾病的发生和造成的损失，已成为当前养殖业发展的迫切需求。该发明根据国内外重大动物疫病快速诊断与检测需求及药物残留，非法添加剂的检测需求，针对几种重大动物疫病猪大肠杆菌病、新城疫、高致病性蓝耳病、猪瘟、猪伪狂犬、猪圆环建立不同的检测方法，提高了检测水平与检测效率，市场需求广泛。猪瘟、猪蓝耳病二重RT-PCR快速检测试剂盒、猪伪狂犬病毒-猪细小病毒-猪圆环病毒2型多重PCR检测试剂盒和猪大肠杆菌毒力因子三重PCR等检测试剂盒，同时检测多种疾病，灵敏度高、特异性强。CN103773893ACN103789ACN103773893A权利要求书1/1页1.本发明中的猪瘟、猪蓝耳病二重RT-PCR快速检测试剂盒、猪伪狂犬病毒-猪细小病毒-猪圆环病毒2型多重PCR检测试剂盒和猪大肠杆菌毒力因子三重PCR的检测试剂盒在市场中未见有报道，填补国内空白。2.试剂盒可同时扩增多种目的基因条带，同时检测两种或三种疾病，节省时间和试剂；灵敏度高，能将pg量级的起始待测模板扩增到微克水平，在病毒的检测中，灵敏度可达3个RFU。2CN103773893A说明书1/3页生物检测技术及检测试剂盒技术领域[0001]生物检测技术及检测试剂盒属于分子诊断技术领域。背景技术[0002]生物医药产业作为新兴的朝阳行业日益受到我国政府的高度重视。生物检测技术及检测试剂盒的研制技术属分子诊断技术，广泛应用于动物、肉制品、奶制品等方面的检测。[0003]分子诊断是当代医学发展的重要前沿领域之一，其核心技术是基因诊断，常规技术包括：聚合酶链式反应（PCR），DNA测序（DNAsequencing)，荧光原位杂交技术（FISH），DNA印迹技术（DNAblotting），单核苷酸多态性（SNP），连接酶链反应（LCR），基因芯片技术（genechip）。其中，PCR产品占据目前分子诊断的主要市场，基因芯片是分子诊断市场发展的主要趋势。PCR产品灵敏度高、特异性强、诊断期短，可进行定性、定量检测，应用广泛，为早期诊断、早期治疗提供了有效的帮助。基因芯片是分子生物学、微电子、计算机等多学科结合的结晶，综合了多种现代高精尖技术，被专家誉为分子诊断行业的终极产品。但其成本高、开发难度大，目前产品种类很少，只用于科研和药物筛选等用途。[0004]随着分子生物学技术的不断发展，目前已有多种检测方法和检测试剂盒用于这些传染病的检测。目前最常用的有PCR检测试剂盒、RT-PCR检测试剂盒、实时荧光定量PCR检测试剂盒、ELISA检测试剂盒、LAMP检测试剂盒等。[0005]PCR：英文全称：polymerasechainreaction，即：聚合酶链式反应。1985年，美国科学家KaryMullis经过两年的努力，发明了PCR技术，并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文。从此，PCR技术得到了生命科学界的普遍认同。PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断。[0006]RT-PCR：英文全称是reversetranscriptionPCR，即反转录PCR。它是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。[0007]酶联免疫吸附试验（ELISA）:英文全称是EnzymeLinkedImmunosorbentAssay。是目前应用最广泛的病毒抗原及抗体的检测技术，已经建立了多种方法，如间接法、双抗体夹心法、捕获法和生物素亲和素法等。近年来，在传统ELISA方法的基础上，研究者们对其进一步改进并建立了膜酶免疫试验和微孔膜免疫试验。[0008]LAMP：N