茶叶中儿茶素类含量的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103940920103940920A(43)申请公布日2014.07.23(21)申请号201310485392.0(22)申请日2013.10.16(71)申请人贵州省茶叶研究所地址550006贵州省贵阳市小河区金农社区金农路1号贵州省农业科学院内(72)发明人周顺珍龚雪周国兰郭灿郑文莉(74)专利代理机构贵阳中新专利商标事务所52100代理人李亮程新敏(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书4页说明书4页附图1页附图1页(54)发明名称茶叶中儿茶素类含量的检测方法(57)摘要本发明公开了一种茶叶中儿茶素类含量的检测方法，采用水来代替稳定溶液来配置测试液及标样工作液，提高了测试液及标样工作液分离效果，使基本上可以回到基线，且可以保存的时间较长，保存在-4℃条件下，至少半年以上。而且无论是标样工作液还是测试液，七种化合物都能完全分离，且分离效果良好。色谱峰的保留时间重现性也相对较好。并且，有效避免了现有采用稳定液存在的容易污染排气阀滤心、造成堵塞的问题。还通过改进色谱条件，提高了液相色谱柱的选择范围。CN103940920ACN103942ACN103940920A权利要求书1/1页1.一种茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤:1）将待测茶叶磨碎，将磨碎的茶叶加入70℃的质量百分比为70%的甲醇溶液中，将溶液搅拌均匀后，在70℃的水浴中进行浸提，使浸提溶液自然冷却至室温；将冷却后的浸提溶液进行离心提取，取上清液；再将离心提取的残渣重复上述步骤进行提取，将提取液合并摇匀，进行过滤后，获得母液备用；2）将母液加水定容后，进行过滤，获得测试液；然后将测试液按照色谱条件为：90～80%A相、10～20%B相-->10～15min内由90～80%A相→80%～75%A相、20～25%B相-->20～25min内由80%～75%A相A相→70%～60A相、30～40%B相-->25～30min内由70%～60A相→90～80%A相、10～20%B相-->90～80%A相、10～20%B相保持5min，进行色谱分析，待压力和柱温稳定后，进行空白运行；准确吸取混合用水配制的标准工作液注射入HPLC，在相同的色谱条件下注射与标准工作液相同体积的测试液；测试液以峰面积定量；流动相A为水，流动相B为N，N二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸的组合为，N，N二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸之间的体积比为35～45：1.5～2.5：1.5～2；式中：C1表示标样浓度%；A表示样品峰面积、V表示样品提取液体积ml；fstd表示所测成分的校正因子；d表示稀释因子；m1表示取样量g；m表示样品的干物质含量%。2.根据权利要求1所述的茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于：步骤1）中所述的浸提的时间为10分钟，每隔5分钟进行一次搅拌。3.根据权利要求1所述的茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于：步骤1）中所述的离心提取的转速为3500r/min，提取时间为10分钟。4.根据权利要求1所述的茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于：步骤1）及步骤2）中所述的过滤采用0.45μm膜进行过滤。5.根据权利要求1所述的茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于：所采用的液相色谱柱的型号为C18，粒径为5μm，250mm×4.6mm或粒径为5μm，150mm×4.6mm。2CN103940920A说明书1/4页茶叶中儿茶素类含量的检测方法技术领域[0001]本发明涉及一种茶叶科学领域，特别是一种茶叶中儿茶素类含量的检测方法。背景技术[0002]现在，普遍厂家的C18(粒径5um，250mm×4.6mm)色谱柱不能分离EGCG和EC，这也是多家实验室反映的问题。经咨询标准起草人，也说是柱子的问题，推荐买大连依利特HyspersilODS2C18(粒径5um，250mm×4.6mm)色谱柱后，标样基本上可以分开，但也不是很理想，而样品的分离效果就更差一些。且在EGC和+C色谱峰的右侧或者左侧出现一干扰峰，致使其分离度降低，峰形不对称，拖尾严重，给积分造成较大误差。现有的方法中，用稳定液配制的标样工作液分离效果不如用水的好，且不能保存较长时间。而且用稳定液配制测试液容易污染排气阀滤心，造成堵塞。发明内容[0003]本发明所要解决的技术问题是：提供一种茶叶中儿茶素类含量的检测方法，它能将标样工作液或样品测试液中的多种化合物完全分离，且分离效果良好，色谱峰的保留时间重现性也相对较好，以克服现有技术的不足。本发明的是这样实现的：茶叶中儿茶素类含量的检测方法，包括如下步骤:1）将待测茶叶磨碎，将磨碎的茶叶加入70℃的质量百分比为7