一种基于液相色谱/质谱联用的拟靶标代谢组学分析方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN104297355104297355A(43)申请公布日2015.01.21(21)申请号201310300518.2(22)申请日2013.07.17(71)申请人中国科学院大连化学物理研究所地址116023辽宁省大连市中山路457号(72)发明人许国旺陈世礼孔宏伟路鑫李勇(74)专利代理机构沈阳科苑专利商标代理有限公司21002代理人马驰(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权权利要求书2页利要求书2页说明书6页说明书6页附图4页附图4页(54)发明名称一种基于液相色谱/质谱联用的拟靶标代谢组学分析方法(57)摘要本发明为一种基于液相色谱/质谱联用的拟靶标代谢组学分析方法，将待分析的样本按照组别分别制作合并样本，利用超高效液相色谱/四极杆-飞行时间质谱的数据依赖采集模式自动采集各合并样本所含代谢物的二级质谱，采用定性分析软件提取所测得代谢物的保留时间、母离子及其子离子信息，根据子离子响应强度筛选出代谢物的特征离子对信息，并将各合并样本得到的特征离子对信息进行加和。然后在实际样本中，利用UHPLC/QQQMS通过动态多反应监测模式对得到的代谢物特征离子对进行扫描，获得相应的谱图，然后通过定量分析软件进行积分，得到待测样本所含的代谢物及其含量信息。CN104297355ACN10429735ACN104297355A权利要求书1/2页1.一种基于液相色谱/质谱联用的拟靶标代谢组学分析方法，其特征在于：利用超高效液相色谱/四极杆-飞行时间质谱的数据依赖采集模式自动采集各由两个以上单个的生物样本混合的合并样本所含代谢物的二级质谱；然后利用定性软件从二级质谱的质谱数据中提取所测得样本中代谢物的保留时间、母离子及其子离子信息，根据子离子响应强度筛选出代谢物的特征离子对信息，并将各合并样本得到的特征离子对信息进行加和；最后在实际待测的所有单个的生物样本中，利用超高效液相色谱/三重四极杆质谱通过动态多反应监测模式对得到的代谢物特征离子对进行扫描，获得相应的谱图，再通过定量分析软件对获得谱图中的色谱峰进行面积积分求和，得到待测样本所含的代谢物及其含量信息。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：各合并样本的制备及其所含代谢物二级质谱的获取步骤如下，1）对将进行代谢组学分析的两个以上生物样本按照所需进行分组或作为同一组不分组，对每组的样本分别进行等体积移取或等质量称量并组内合并，其中每组样本至少取两个以上单个的生物样本进行合并，得到每组相应的合并样本；所述生物样本包括但不限于人或动物的血、尿、组织、唾液等中的一种，或植物的根、茎、叶、果实等中的一种，或微生物的细胞培养液等；按照所需进行分组是指按照所需类别进行分组：如疾病研究中按照疾病组、对照组等进行分类，含有所研究疾病的样本为疾病组，不含所研究疾病的样本为对照组，其中所称疾病包括但不限于肝癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、大肠癌、胃癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌或前列腺癌症等各种癌症，高血压、糖尿病、冠心病、心肌梗塞、阿兹海默病、或帕金森病等医学上定义的疾病；或，对其它研究则视研究目的和样本来源对样本进行相应的分组；并根据分析目标对各合并样本进行代谢物提取（如组织样本采用甲醇/氯仿体系提取，血浆/血清样本采用甲醇或乙腈体系提取等），得到可供色谱/质谱分析的进样溶液；2）利用超高效液相色谱/四极杆-飞行时间质谱的数据依赖采集模式自动采集各合并样本所含代谢物的二级质谱。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于：特征离子对的获取步骤如下，1）利用定性软件（MassHunterQualitativeAnalysis、或AnalystPeakView等）提取对各合并样本采集所测得代谢物的保留时间、母离子及其子离子信息；2）将母离子对应的子离子中响应最强的选为特征子离子，进而由母离子和对应的特征子离子构成特征离子对；3）将在各合并样本中得到的所有特征离子对加和起来，得到待测样本的特征离子对信息。这里所称的加和是指只要在任一合并样本中出现一次的特征离子对都算作最终的特征离子对，而在多个合并样本中均出现的特征离子对只算一次。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于：拟靶标代谢组学分析方法建立步骤如下，1）将整合得到的代谢物特征离子的母离子、子离子和保留时间信息输入到超高效液相色谱/三重四极杆质谱工作站，并根据质谱响应优化代谢物特征离子对检测的去簇电压、碰撞能等质谱条件；2）在实际样本中，通过动态多反应监测模式对得到的代谢物特征离子对进行扫描，获得相应的谱图；2CN104297355A权利要求书2/2页3）通过定量分析软件（MassHunterQuantitativeAnalysis、或A