谷氨酸转运体在高热惊厥大鼠脑内的表达及意义.docx

谷氨酸转运体在高热惊厥大鼠脑内的表达及意义【摘要】目的探讨大鼠反复高热惊厥后脑内谷氨酸及谷氨酸转运体的表达情况进行定性及定量分析。方法热水浴法建立FS模型。15日龄雄性Wistar大鼠60只随机分为正常对照组（n=10）和高热处理组（n=50）其中高热处理组按大鼠是否有惊厥又分为高热未惊厥组和高热惊厥组。免疫组织化学法检测谷氨酸及谷氨酸转运体在大鼠脑组织各区的表达。结果①惊厥对照组大鼠皮层及海马CA3区Glu的表达较正常对照组明显增加。②惊厥对照组大鼠皮层及海马CA3区GLT-1的表达均低于正常对照组。讨论高热惊厥时脑细胞谷氨酸表达上升而脑细胞膜和细胞间质中的谷氨酸转运体GLT-1表达下降。【关键词】高热惊厥；谷氨酸；谷氨酸转运体高热惊厥（febrileconvulsionFC）是一种特殊类型的癫痫综合征是小儿时期最常见的惊厥性疾病但反复发作或长时间发作的FC可造成脑损伤目前对本病的研究仍集中于对其行为及脑电图变化的观察而对其神经病理改变的研究较少。本研究用热水浴惊厥模型诱导生后15dWester大鼠发生热性惊厥利用免疫组织化学方法对正常对照组、高热及高热惊厥组大鼠脑内谷氨酸及谷氨酸转运体的表达情况进行定性及定量分析为热性惊厥时的神经病理学研究提供新思路1材料与方法1.1实验动物与分组15日龄雄性Wistar大鼠60只体重30-45g（购自内蒙古大学实验动物中心）。自由喂养1d后进行实验。将大鼠称重后编号随机分为正常对照组（37.0℃水浴n=10）和高热处理组（45.2℃水浴n=50）其中高热处理组按大鼠是否有惊厥又分为高热未惊厥组和高热惊厥组。从正常对照、高热未惊厥和高热惊厥组中分别随机取10只用于进行脑组织免疫组织化学染色观察。1.2化学试剂本实验中所采用的化学试剂及免疫组化试剂盒分别购自北京化学试剂公司及福州迈新生物科技公司。1.3热性惊厥动物模型的建立参照文献报道[1]建立热性惊厥动物模型高热惊厥组热水浴：水浴箱温度设定为45.2℃。从大鼠生后15d开始隔日诱导惊厥1次共10次。正常对照组水浴温度为37℃处置方法同高热惊厥组。记录大鼠的惊厥潜伏期、惊厥时体温、惊厥持续时间及惊厥级别评[2]（惊厥分级：0级0分：无惊厥；1级1分：面部抽动；2级2分：点头；3级3分：前肢阵挛抽搐；4级4分：全身强直；5级5分：全身强直阵挛）。1.4脑组织谷氨酸和谷氨酸转运体表达检测1.4.1脑标本取材和切片制备并进行免疫组化染色各组在FC组末次惊厥24h予100g/L水合氯醛（3.5mL/kg）腹腔注射麻醉后4%多聚甲醛PB左心室灌注固定取脑后固定6-8h。脑标本入30%蔗糖磷酸缓冲液（PH=7.4）过夜自头端向尾端连续冻切脑片厚30μm切片连续取片三张为一套分别进行尼氏染色组织定位和Glu及GLT-1免疫组化染色。1.4.2图像结果处理每张切片分别在海马CA3区、颞叶皮层（CTL）随机观察5个不连续视野（×400）使用Olympus自动图像采集系统进行图像采集脑片呈现棕黄色区域为阳性反应用IPP软件分析系统进行计数和平均光密度分析取其OD值。1.5统计学分析应用SPSS12.0软件进行统计学分析。数据以均数±标准差（χ±s）表示独立样本t检验和单因素方差分析进行组间比较以P2结果2.1热水浴诱导大鼠惊厥结果正常对照组大鼠在37.0℃水浴中游动自如出水前后无异常变化。高热惊厥组大鼠在45.2℃热水中每次诱导均发展为惊厥惊厥时的时体温在42℃-44℃之间平均体温为（42、8±0、4℃）第1次惊厥发作最长潜伏期为5min57s以后随诱发次数的增加惊厥阈值逐渐降低惊厥潜伏期呈缩短趋势（第2-10次最长惊厥潜伏期分别为5min30s、5min19s、4min51s、4min35s、4min2s、3min45s、3min25s、3min4s、2min47s、）。但惊厥发作程度及发作时间无显著趋势性变化。总的惊厥级别多为4-5级。惊厥发作3次后部分大鼠出现行为改变表现为易激惹攻击性强或反应迟钝、活动减少。2.2谷氨酸（Glu）、谷氨酸转运体（GLT-1）在大脑皮层及海马的表达惊厥对照组大鼠皮层及海马CA3区Glu的表达较正常对照组明显增加表现为计数、平均光密度与正常对照组相比增加有统计学意义（P3讨论人类热性惊厥多发于6个月-3岁研究表明生后5-7d大鼠的脑发育程度与足月新生儿的脑发育程度相当15d大鼠的脑发育程度与1岁儿童相当28-30d大鼠的脑发育程度与2岁儿童相当[3]。大鼠55d左右进入青春期60d性成熟。本