生物技术培养鹿茸细胞并大规模提取鹿茸活性多肽.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106319637A(43)申请公布日2017.01.11(21)申请号201610765411.9(22)申请日2016.08.31(71)申请人高伟地址100037北京市西城区百万庄黄瓜园西三门申请人高辰高云(72)发明人高伟高辰高云(51)Int.Cl.C40B40/02(2006.01)C12N5/071(2010.01)C12P21/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称生物技术培养鹿茸细胞并大规模提取鹿茸活性多肽(57)摘要我们的祖先发现鹿茸的保健医疗价值，验用两千余年。当代研究证实，鹿茸有适于人体需要的氨基酸等重要物质40余种，特别是发现了以鹿茸多肽为主的活性物质。鹿茸多肽能影响遗传信息，增加核酸蛋白质数量，修复细胞，促进细胞再生，被视为鹿茸功能的物质基础。但用鹿茸提取多肽产率低，不能大量生产。本发明运用生物技术大规模生产鹿茸多肽，达到活性强、产率高、无药物残留绿色环保。其技术特征是，将鹿茸生长点的原代单层细胞传代培养，并筛选出高产细胞系(株)，建立种子细胞库。建立一个标准生物药品厂，利用转瓶旋转培养或细胞反应罐悬浮培养工业化生产鹿茸细胞，大规模提取鹿茸细胞多肽，年产鹿茸多肽50吨以上。CN106319637ACN106319637A权利要求书1/1页1.利用转瓶或细胞反应罐培养鹿茸生长点细胞，生产提取鹿茸多肽等活性物质。2.根据权利要求1所述，用梅花鹿或马鹿鹿茸生长点细胞静止培养成单层细胞，传代培养50次形成细胞系(株)，超低温冻存。建立种子细胞库。3.根据权利要求1所述，用转瓶旋转培养技术或细胞反应罐培养技术大规模培养鹿茸细胞。4.根据权利要求1所述，利用上述权利要求3生产的鹿茸细胞，用“三步提取法”，提取获得鹿茸活性多肽，多肽分子质量为3.2-7.6kDa。5.根据权利要求1所述，从鹿茸细胞中提取获得鹿茸多胺活性物质。6.根据权利要求1所述，从鹿茸细胞中提取获得鹿茸多醣活性物质。2CN106319637A说明书1/5页生物技术培养鹿茸细胞并大规模提取鹿茸活性多肽一、技术领域[0001]近代科学研究从鹿茸中检测出40余种不同成份：其中有26种微量元素，含有30％以上无机物。有19种以上氨基酸，蛋白质占鹿茸干重50％以上，并且含有丰富的磷脂、脂肪。特别是从鹿茸中提取获得多肽等生物活性物质，对鹿茸的价值从模糊感性认识上升到理性认知。鹿茸多肽能从生命源头上作用于遗传物质，干涉生命的全过程，控制遗传翻译密码、增加蛋白质核酸合成，促进细胞修复与再生，提高人体免疫力控制癌细胞。二、背景技术[0002]1.鹿茸组织学与鹿茸生长点[0003]鹿茸是鹿后天生长的雄性器官。由神经血管结缔组织、皮肤软骨等多种细胞构成，受紫外线光信号控制，内分泌系统支配生长鹿茸(鹿角)，每年一次周期性脱落。雄鹿在出生次年春从头盖上部骨膜隆起，突出形成两个柱状幼角。分布在不同地域的马鹿、梅花鹿等都依各地光照、温差时间不同，按规律生长不同形态鹿茸。它们内部结构基本一致。科技人员高云从事鹿病研究，走遍全国养鹿场，观察过鹿茸生长过程、鹿茸形态和结构，以及鹿病和生茸的关系。鹿茸生长快速，每日能增加长度2公分，构成鹿茸的各类细胞快速复制，细胞数增多是哺乳动物中生长最快的细胞，超过癌细胞。[0004]当鹿体内生理条件成熟，头顶干细胞开始萌动，以不超三个月时间，完成鹿茸生长。之后茸体骨化，生理活性物质消失，形成鹿角干叉，只能作为熬制鹿角胶材料。通过研究我们能在鹿茸活性物质最多时期、含量最多部位、鹿茸干细胞分化生长形成生长点，在最佳部位採取培养原代细胞组织材料。通过发现鹿茸组织生理学特点，从鹿茸角尖最佳生长点取材，作为培养鹿茸细胞的原始材料，是本发明创新点之一。[0005]2.鹿茸组织生理学。[0006]鹿茸是鹿角骨化前期软骨组织器官，茸体外部具有皮肤茸毛。茸体内部以其组织结构不同，分为上、中、下三段。上段是皮肤及密质的皮下质，下连球体状生茸组织，富含鹿茸干细胞。与之连接的是由其分化形成的含活性物质最多的鹿茸前体细胞层，组成鹿茸生产点，俗称“腊片部位”。鹿茸中段细胞分化长成软骨组织，下段开始钙化形成骨组织。当梅花鹿形成4个分支，马鹿形成5个分叉时停止生长。鹿角由下向上石灰化形成坚硬骨质，脱皮成为格斗武器，进入配种期次年春季自行脱落。[0007]鹿角从生长至脱落，是生物体由生长到消亡、反之也是由消亡到生长全过程的演释。我们观察发现，这种生命科学的奇妙现象是鹿茸活性多肽干涉控制的结果。[0008]3.鹿茸活性物质[0009]鹿茸是活性物质的天然生物存储库，角尖生长点存在多肽同时存在多胺、多醣等。鹿茸多肽等特殊活性物质其功能首先是作用其鹿茸自身，其突出特点是能够使鹿茸干细