一种氯氰菊酯降解菌菌粉的制备方法及其在土壤中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106434452A(43)申请公布日2017.02.22(21)申请号201610875251.3(22)申请日2016.10.08(71)申请人西华大学地址610039四川省成都市金牛区金周路999号(72)发明人唐洁刘波张庆陈廷廷史颖曾朝懿曾林谭宵(74)专利代理机构四川君士达律师事务所51216代理人芶忠义(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)B09C1/10(2006.01)C12R1/085(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种氯氰菊酯降解菌菌粉的制备方法及其在土壤中的应用(57)摘要本发明提供了一株氯氰菊酯降解菌BBCP-017，经形态、生理、分子鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)；该菌株已于2016年8月22日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNO.12886。本发明的蜡样芽孢杆菌BBCP-017用来制备菌粉，是作为降解土壤中氯氰菊酯残留的微生态菌剂，按质量体积百分比0.001％～0.005％的比例复溶后喷洒至含氯氰菊酯的土壤中。本发明的蜡样芽孢杆菌菌粉，在田间试验中，7d对土壤中的氯氰菊酯降解率达89.03％；对受氯氰菊酯污染的土壤环境有着广阔的应用前景。CN106434452ACN106434452A权利要求书1/1页1.一种氯氰菊酯降解菌菌粉的制备方法，其特征在于，将氯氰菊酯降解菌接种至种子培养基，于34～40℃振荡培养12～36h，再转接至发酵培养基在，于34～40℃振荡发酵培养48～72h，置于-20～-80℃冷冻处理1～8h，再于78～85℃水浴处理1～4h，3000～8000rpm离心10～30min，在无菌条件下收集菌泥复溶于0.8～1.5％NaCl溶液中，进行二次离心，3000～5000rpm离心10～30min，随后将得到的二次离心菌泥与冻干保护剂按照1:1～5的重量比混合均匀，-38～-42℃真空冷冻干燥后制成含菌量为0.5～2.5×1011CFU/g的菌粉；所述氯氰菊酯降解菌为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)BBCP-017，于2016年8月22日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNO.12886。2.根据权利要求1所述氯氰菊酯降解菌的菌粉的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基配方为：胰蛋白胨0.3～1.5％、酵母浸出粉0.3～1.5％、NaCl0.3～1.5％、MnSO40.01～0.25％，蒸馏水1000mL。3.根据权利要求2所述氯氰菊酯降解菌的菌粉的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基的pH为6.5～7.5。4.根据权利要求1所述氯氰菊酯降解菌的菌粉的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂配方为：脱脂奶粉5～20％、葡萄糖0.5％～5％、蒸馏水1000mL。5.根据权利要求4所述氯氰菊酯降解菌的菌粉的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂pH为6.3～6.8。6.根据权利要求1～5任一项所述氯氰菊酯降解菌的菌粉制备方法制备的菌粉。7.根据权利要求6所述氯氰菊酯降解菌的菌粉在降解土壤中氯氰菊酯的应用。8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，将菌粉按质量体积百分比为0.001％～0.005％的比例复溶于无菌水或1～15％脱脂奶粉溶液中，再将菌粉悬液按照体积比1～5:100的比例添加至含氯氰菊酯的土壤中。2CN106434452A说明书1/4页一种氯氰菊酯降解菌菌粉的制备方法及其在土壤中的应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体来说是一种氯氰菊酯降解菌菌粉的制备方法及其在土壤中的应用。背景技术[0002]农作物是人类赖以生存和发展的重要食品，在自然环境中易发生病虫害，常用农药防治，以提高农作物品质和产量。但农药的大量使用使作物、土壤及水源受到不同程度污染，严重威胁环境和食品安全。目前氯氰菊酯以其杀虫谱广、高效、低残留、性质稳定、安全系数高等优点，在防治农业害虫方面具有广泛应用；又因其应用范围广、接触人群多、有蓄积性等，从而引起农残超标、水土污染、人体中毒等现象频发。由于氯氰菊酯理化性质比较稳定，具有耐光、热分解，且残留范围广，传统物理化学方法处理难度大、成本高。与其他方法相比，微生物降解具有降解速度快、操作简单、成本低、无二次污染等优点。[0003]我国耕地自然环境复杂，污染程度差异较大。利用土著微生物，降解速度慢，降解能力不稳定，不能满足实际要求。因此，筛选适应性强，环境友好的降解菌株是解决上述问题的根本方法。研究可进一步丰富广谱性拟除虫菊酯降解菌资源库，为受氯氰菊酯污染农作物生长环境的生物修复及进一步保障其食用安全提供菌株