一种烟草及烟草制品中马来酰肼残留量的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106526024A(43)申请公布日2017.03.22(21)申请号201610985773.9(22)申请日2016.11.09(71)申请人中国烟草总公司四川省公司地址610041四川省成都市高新区世纪城路936号烟草兴业大厦(72)发明人熊巍陶晓秋庞夙韶济民张海燕杨雪(74)专利代理机构四川君士达律师事务所51216代理人杨宜付芶忠义(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书2页说明书4页附图1页(54)发明名称一种烟草及烟草制品中马来酰肼残留量的检测方法(57)摘要本发明公开一种烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，所述烟草及烟草制品包括烟叶和卷烟烟丝，包括以下步骤：配制标准溶液、盐酸回流提取、分散固相萃取纯化、UPLC-MS/MS分析测定。本发明针对烟草抑芽剂马来酰肼，利用超高效液相色谱-串联质谱仪（UPLC–MS/MS），建立UPLC–MS/MS快速分析烟草及烟草制品中马来酰肼残留量的方法。选取的串联质谱，分离度和灵敏度都明显高于标准方法（YC/T405.5-2011）的紫外检测器。CN106526024ACN106526024A权利要求书1/2页1.一种烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，所述烟草及烟草制品包括烟叶和卷烟烟丝，其特征在于，包括以下步骤：步骤a）配制标准溶液；准确称取马来酰肼标准品,精确至0.0001g，用超纯水溶解定容，制得标准储备液；稀释标准储备液得到标准工作液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存备用；用超纯水准确配置氘代内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存；取一定量的内标标准储备液，用超纯水稀释定容，制得内标标准工作液；标准工作液和内标标准工作液冷藏保存；步骤b）盐酸回流提取；称取试样于圆底烧瓶中，加入盐酸提取液，再加入内标标准工作液；将圆底烧瓶放置于加热套或者油浴锅中，圆底烧瓶上安装球形冷凝管，加热回流；控制回流速度，使蒸汽升至球形冷凝管第二球处，回流稳定后开始计时；步骤c）分散固相萃取纯化；从圆底烧瓶中移取上清液于旋盖离心管中，分别向离心管中加入N-丙基乙二胺吸附剂，漩涡振荡混合，吸取上清液经有机相滤膜过滤后用超纯水稀释定容待测；步骤d）UPLC-MS/MS分析测定；分别对前述工作液进行UPLC-MS/MS分析，并对各标样峰面积与内标的峰面积的比值（y）和其浓度（x）进行线性回归分析，得到标准曲线；色谱条件：AtiantisUPLCHSST3超高效液相色谱柱，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm；流动相A：体积分数为0.1%的甲酸水溶液，流动相B：体积分数为0.1%的甲酸乙腈溶液；流速0.45mL/min；柱温45°C；进样量2µL；梯度洗脱条件：0~2min，100%A~100%A；2~2.8min，100%A~30%A；2.8~3.0min，30%A~20%A；3.0~4.0min，20%A~5%A；4~6min，5%A~5%A；6~6.1min，5%A~100%A；6.1~8min，100%A~100%A；质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，喷雾电压（IS）：3.0kV；离子化温度500℃；雾化气流量：800L/Hr；锥孔气(cone)流量50L/Hr；碰撞气流量为0.15ml/min；碰撞气为氩气，其余气体为氮气；驻留时间为100msec，正离子MRM模式采集。2.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤a）中，内标标准储备液为氘代内标，所述氘代内标为马来酰肼-d2。3.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，称取试样的重量为5g，精确到0.01g。4.根据权利要求1或3所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，圆底烧瓶中加入盐酸提取液体积为50mL,浓度为4mol/L，加入氘代内标体积为250μL，浓度为0.2mg/mL。5.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，加热套的温度为180℃。6.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，油浴锅的温度为150℃。7.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，加热回流的时间为1h。2CN106526024A权利要求书2/2页8.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，步骤c）中，所述离心管的体积为2mL，加入PSA吸附剂的质量为25mg。9.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在