一种用于细胞共培养的微流控芯片及其细胞培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106544270A(43)申请公布日2017.03.29(21)申请号201611107680.2(22)申请日2016.12.06(71)申请人北京理工大学地址100081北京市海淀区中关村南大街5号(72)发明人马宏陈钰王品虹邓玉林于世永李瑞(74)专利代理机构北京思睿峰知识产权代理有限公司11396代理人谢建云赵爱军(51)Int.Cl.C12M3/00(2006.01)C12M3/06(2006.01)C12N5/09(2010.01)权利要求书2页说明书5页附图2页(54)发明名称一种用于细胞共培养的微流控芯片及其细胞培养方法(57)摘要一种用于细胞共培养的微流控芯片及其细胞培养方法，由下至上依次包括基底层、细胞培养腔室层、上盖板层，细胞培养腔室层中设有筛绢将细胞培养腔室分为上下两层，上层为培养基交换层、下层为细胞培养层；相邻的细胞培养腔室之间设有微孔滤膜；在上盖板层对应每个细胞培养腔室位置至少设有一个上盖板通孔，与筛绢通孔位置相互对应，对应上盖板通孔位置设有接头，接头内设有管道，用于培养基交换、细胞接种或检测。本发明的细胞共培养微流控芯片可有效地截留悬浮细胞，从而实现贴壁细胞、悬浮细胞或悬浮细胞与贴壁细胞的微流控细胞共培养。CN106544270ACN106544270A权利要求书1/2页1.一种用于细胞共培养的微流控芯片，所述微流控芯片由下至上依次包括基底层、细胞培养腔室层、上盖板层，其特征在于，所述细胞培养腔室层由若干细胞培养腔室在同一平面相互连通而成，用于细胞培养，所述细胞培养腔室层中设有筛绢将每个所述细胞培养腔室分为上下两层，上层为培养基交换层、下层为细胞培养层，每个细胞培养腔室内的筛绢上均设有筛绢通孔；在所述上盖板层对应每个细胞培养腔室位置至少设有一个上盖板通孔，至少一个所述上盖板通孔与所述筛绢通孔位置相互对应，在上盖板层上对应所述上盖板通孔位置设有接头，所述接头内设有管道，用于培养基交换、细胞接种或检测。2.根据权利要求1所述的用于细胞共培养的微流控芯片，其特征在于，在相邻的所述细胞培养腔室之间设有微孔滤膜，微孔滤膜贯穿细胞培养腔室层分别与上盖板层和基底层相连，用于分隔相邻的细胞培养腔室。3.根据权利要求1所述的用于细胞共培养的微流控芯片，其特征在于，所述基底层为经过组织培养处理的透明材料；或者为通过包被达到细胞培养要求的透明材料：聚对苯二甲酸乙二醇酯PET、玻璃、聚氯乙烯PVC或聚苯乙烯PS。4.根据权利要求1所述的用于细胞共培养的微流控芯片，其特征在于，在上盖板层和细胞培养腔室层对应两个细胞培养腔室之间相邻位置设有观测区域，所述观测区域为硬质透明材料，用与观测相邻两个细胞培养腔室内的细胞。5.根据权利要求2所述的用于细胞共培养的微流控芯片，其特征在于，所述筛绢孔径为200目-700目；所述微孔滤膜的孔径为50nm-1600nm；所述细胞培养腔室深度为0.5mm-2mm。6.根据权利要求1所述的用于细胞共培养的微流控芯片，其特征在于，在所述上盖板层对应每个细胞培养腔室位置设有3个上盖板通孔，其中上盖板通孔一通过管道分别与外界培养基和所述培养基交换层相连，用于输入新鲜培养基；上盖板通孔二通过管道分别与所述培养基交换层和废液收集装置或检测装置相连，用于输出废液或细胞检测；上盖板通孔三通过管道穿过筛网通孔分别与外界和细胞培养层相连，用于细胞接种。7.根据权利要求1所述的用于细胞共培养的微流控芯片，其特征在于，所述基底层、细胞培养腔室层、上盖板层和接头为丙烯腈-丁二烯-苯乙烯塑料ABS、聚氯乙烯PVC或聚甲基丙烯酸甲酯PMMA材料，由环氧树脂灌封胶或聚甲基丙烯酸甲酯PMMA双面胶相互粘合。8.根据权利要求2所述的用于细胞共培养的微流控芯片，其特征在于，所述微孔滤膜材质为聚碳酸酯，分别与上盖板层和基底层黏接。9.根据权利要求1所述的用于细胞共培养的微流控芯片，其特征在于，所述用于细胞共培养的微流控芯片用于贴壁细胞、悬浮细胞或贴壁细胞和悬浮细胞的共同培养。10.利用权利要求1所述的用于细胞共培养的微流控芯片培养细胞的连续灌流培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1将贴壁细胞用胰蛋白酶消化成细胞悬液后，1000rpm离心5min，并用培养基进行细胞重悬，并将细胞悬液稀释至5×104-5×105个/mL，作为种子液，通过上盖板通口穿过筛网通孔在细胞培养层进行细胞接种；步骤2将悬浮细胞稀释至合适范围内，作为种子液，通过上盖板通口穿过筛网通孔在细胞培养层进行细胞接种；步骤3将所述用于细胞共培养的微流控芯片置于37℃,浓度5％CO2的环境下，静置3小时2CN106544270A权利要求书2/2页后，观察细胞形态，若贴壁细胞已经形态正常，则以0