褪黑素对放疗后大鼠卵巢的保护作用.docx

褪黑素对放疗后大鼠卵巢的保护作用《医学研究生学报》2014年第六期1材料与方法1．1标本采集各组大鼠于射线照射后每日取阴道分泌物涂片光镜观察动情周期照射后2周于动情间期处死大鼠主动脉弓取血。取双侧卵巢右侧卵巢4%多聚甲醛固定左侧卵巢存于液氮罐。1．2激素测定方法采用ELISA法测定大鼠血清中的E2、FSH。大鼠主动脉弓采血分离血清按AMEKO试剂公司ELISA试剂盒操作说明进行。1．3组织形态学观察及卵泡计数右侧卵巢石蜡包埋取最大横断面切片后HE染色光镜下计数具有正常卵泡结构的卵泡数［3］分别计数各组大鼠的原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡。1．4caspase3测定采用分光光度法测定大鼠左侧卵巢组织caspase3的活性。由于caspase3可催化底物Ac-DEVD-pNA产生黄色物质pNA因此可以通过测定pNA在405nm的吸光度来测定caspase3的活性。试剂盒购置碧云天生物科技公司按试剂盒操作说明进行。1．8统计学分析所有指标采用SPSS18．0软件进行统计学分析。计量数据检测结果以均数±标准差(x±s)表示;多组均数间的比较用单因素方差分析(One-WayANOVA);组间两两比较满足方差齐性时采用LSD法检验;若方差不齐两两比较采用基于t检验的保守Tambane''''sT2检验以P≤0．05为差异有统计学意义。2结果2．1大鼠动情周期变化各组大鼠干预前均表现为正常动情周期4d为1周期。RT组和RT+MT(25mg/kg)组接受照射24h后仅出现动情后期或动情间期。RT+MT(50mg/kg)组、RT+MT(100mg/kg)组大鼠照射24h后仅出现动情后期或动情间期一周后恢复正常动情周期。对照组动情周期无改变。2．2大鼠血E2和FSH水平变化E2水平变化:射线照射后RT组E2水平显著低于对照组(P＜0．05);其中RT+MT(25mg/kg)组与RT组比较差异无统计学意义(P＞0．05);RT+MT(50mg/kg)组与RT+MT(100mg/kg)组较RT组E2水平显著升高(P＜0．05)且RT+MT(100mg/kg)组E2水平显著高于RT+MT(50mg/kg)组(P＜0．05)作用呈剂量依赖性。FSH水平变化:射线照射后RT组FSH水平显著高于对照组(P＜0．05);其中RT+MT(25mg/kg)组与RT组比较差异无统计学意义(P＞0．05);RT+MT(50mg/kg)组与RT+MT(100mg/kg)组较RT组FSH水平显著降低(P＜0．05)RT+MT(100mg/kg)组FSH水平与RT+MT(50mg/kg)组比较差异无统计学意义(P＞0．05)。见表1。2．3大鼠卵泡数量变化射线照射后RT组卵泡总数显著低于对照组(P＜0．05);其中RT+MT(25mg/kg)组与RT组比较差异无统计学意义(P＞0．05);RT+MT(50mg/kg)组与RT+MT(100mg/kg)组较RT组卵泡总数显著升高(P＜0．05)且RT+MT(100mg/kg)组卵泡总数显著高于RT+MT(50mg/kg)组(P＜0．05)作用呈剂量依赖性。见表2。2．4大鼠卵巢组织光镜下改变对照组卵巢结构清晰卵巢中可见原始卵泡各级发育中的卵泡及成熟卵泡;RT组卵巢可见其皮质增厚结构混乱间质纤维化皮质中原始卵泡数量稀疏各级生长卵泡与成熟卵泡数目锐减见大量闭锁卵泡及多个大的陈旧样黄体组织;RT+MT(100mg/kg)组卵巢结构清晰卵巢中可见原始卵泡各级发育中的卵泡及成熟卵泡并可见少量闭锁卵泡及黄体样物质。见图1。2．5大鼠卵巢组织capase3活性变化对照组大鼠caspase3活性极低射线照射后RT组大鼠caspase3活性较对照组显著升高(P＜0．05);其中RT+MT(25mg/kg)组与RT组比较差异无统计学意义异(P＞0．05);RT+MT(50mg/kg)组与RT+MT(100mg/kg)组较RT组caspase3活性显著降低(P＜0．05)且RT+MT(100mg/kg)组caspase3活性显著低于RT+MT(50mg/kg)组(P＜0．05)作用呈剂量依赖性。见表3。3讨论卵巢是女性生殖系统中对辐射较为敏感的区域随着照射剂量的增加卵巢功能损伤也愈加严重［4］。卵巢功能损伤是接受放疗或者化疗治疗的患者一个主要的远期并发症大剂量、长时间的化疗将会损伤各年龄段患者的卵巢功能导致闭经生殖能力下降或丧失［5］;因此在提高患者的生存率的同时保护卵巢功能减轻或避免放疗所致的卵巢功能损伤成为当下研究的热点。建立有效的放疗模型对于探讨放疗致卵巢功能损伤的机制及其预防