一种褐藻寡糖单体的制备方法及褐藻寡糖.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106755188A(43)申请公布日2017.05.31(21)申请号201611126053.3C07H3/06(2006.01)(22)申请日2016.12.08C12R1/07(2006.01)(71)申请人中国科学院烟台海岸带研究所地址264003山东省烟台市莱山区春晖路17号(72)发明人李莉莉秦松翟诗翔刘正一焦绪栋(74)专利代理机构深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙)44316代理人赵勍毅(51)Int.Cl.C12P19/12(2006.01)C12P19/04(2006.01)C12P19/00(2006.01)C07H3/04(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图3页(54)发明名称一种褐藻寡糖单体的制备方法及褐藻寡糖(57)摘要本发明提供了一种褐藻寡糖单体的制备方法，采用酶解法降解褐藻或褐藻胶得到酶解液，再将所述酶解液分离纯化得到包括甘露糖醛酸二糖及甘露糖醛酸三糖等褐藻寡糖单体，由于本发明采用酶解法降解褐藻，与传统的化学法相比条件温和，制备过程洁净环保，无有害化学物质的添加和残留，且工艺简单。CN106755188ACN106755188A权利要求书1/2页1.一种褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：采用酶解法降解褐藻或褐藻胶得到酶解液；及将所述酶解液分离纯化得到所述褐藻寡糖单体；所述褐藻寡糖单体包括甘露糖醛酸二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖中的一种。2.如权利要求1所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，采用酶解法降解褐藻或褐藻胶得到酶解液，包括下述步骤：步骤110：将室温状态下的嗜糖芽孢杆菌YIC-Alg3接种于海水培养基中，于25-35℃温度条件培养10-24h，得到活化液；步骤120：取适量的所述活化液接种于Alg培养基中，培养20-30h，得到发酵液；步骤130：将所述发酵液离心处理，取上清液加入硫酸铵至所述硫酸铵的饱和度为75％-85％，静置12-24h后再恒温离心处理，获取沉淀物；步骤140：将所述沉淀物用磷酸盐缓冲液充分溶解后，于0-4℃温度条件下离心处理，得到的上清液即为粗酶液；步骤150：将所述粗酶液添加于褐藻浆液或褐藻胶溶液中，并于30-45℃摇床内酶解20-30h后再离心处理，取上清液，得到所述酶解液。3.如权利要求2所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，步骤110中，所述嗜糖芽孢杆菌YIC-Alg3的保藏单位名称为中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期为2016年03月02日，保藏号为CGMCCNO12155。4.如权利要求2所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，步骤110中，所述海水培养基的配方为：酵母粉5g、蛋白胨10g、海水1000ml、pH7.2-7.4。5.如权利要求2所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，步骤120中，所述Alg培养基的配方为：海藻酸钠5g、硫酸氨5g、硫酸镁1g、磷酸氢二钾2g、去离子水1000ml，pH7.2-7.4。6.如权利要求2中任意一项所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，步骤140中，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2-7.4。7.如权利要求2所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，步骤S150中，向褐藻浆液或褐藻胶溶液中添加的粗酶液体积分数为2.5-7.5％。8.如权利要求2所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，将所述酶解液分离纯化得到所述褐藻寡糖单体，包括下述步骤：步骤210：在所述酶解液加入稀盐酸，使所述酶解液沉淀出古罗糖醛酸及其聚合物；步骤220：对上述混合物离心处理，去除古罗糖醛酸及其聚合物，并收集上清液；步骤230：在所述上清液中，加入乙醇，使得到的混合物中醇体积分数浓度为70％-80％，沉淀、离心后取上清，再冷冻干燥，得到甘露糖醛酸及其聚合物的粗提物；步骤240：将所述甘露糖醛酸及其聚合物的粗提物用纯水溶解后，上样Bio-gelP6柱，并用碳酸氢铵溶液洗脱，收集第一洗脱液；步骤250：将所述第一洗脱液上样Bio-gelP6柱，以碳酸氢铵溶液洗脱，收集第二洗脱液得到所述褐藻寡糖单体。9.如权利要求8所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，在完成步骤240之后，进2CN106755188A权利要求书2/2页行步骤250之前，还包括下述步骤：选取所述第一洗脱液中TLC检测后寡糖组分相同的样本，汇集，浓缩。10.如权利要求8所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，步骤250中，所述碳酸氢铵溶液的浓度为0.4-0.6mol/L。11.一种褐藻寡糖，其特征在于，包括权利要求1-10任一项所述的褐藻寡糖单体。3CN106755188A说明书1/5页一种褐藻寡糖单体的制备方法及褐藻寡糖技术领域[