鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107279130A(43)申请公布日2017.10.24(21)申请号201710455892.8(22)申请日2017.06.16(71)申请人大连海洋大学地址116000辽宁省大连市沙河口区黑石礁街52号(72)发明人王伟张赛赛姜欣彤(74)专利代理机构大连非凡专利事务所21220代理人王廉(51)Int.Cl.A01N1/00(2006.01)G09B23/36(2006.01)权利要求书2页说明书3页(54)发明名称鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法(57)摘要本发明公开一种鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其条件和步骤为：将具有硬骨和软骨两种骨骼的鱼类的鱼体内脏、鳞片和皮肤清理干净，经10%福尔马林固定后再用蒸馏水浸泡1-2天，确保福尔马林去除干净，再使用染料阿尔新蓝把骨骼和软骨染为蓝色，然后经过不同浓度的酒精处理后使用胰蛋白酶处理鱼体肌肉使呈现透明状态，同时保留软骨的蓝色，再用茜素红将硬骨染成红色，经不同比例的0.5%KOH和甘油混合溶液再度透明后使用聚乙烯吡咯烷酮将鱼体塑化，塑化完成后将标本风干，最后用环氧树脂封存标本。完成后的标本可以直接投过树脂和塑化的肌肉看到硬骨染成红色软骨染成蓝色的骨骼标本。CN107279130ACN107279130A权利要求书1/2页1.一种鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其特征在于：依次进行鱼体准备、软骨染色、渗透压调整、鱼体的酶溶液浸泡、硬骨染色、二次透明处理、标本塑化和标本封装步骤，最终获得鱼类骨骼双染色塑封标本。2.根据权利要求1所述的鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其特征在于：所述的鱼体准备步骤为：选择新鲜、完整的具有硬骨和软骨两种骨骼的鱼类的鱼体，将鱼体去除内脏、鳞片和鱼皮后，将其浸泡在10%的福尔马林固定液中2天，也可长期保存，然后将鱼体浸泡在蒸馏水中1-2天，除去鱼体上的福尔马林，待用。3.根据权利要求1所述的鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其特征在于：所述的软骨染色步骤为：将经过鱼体准备步骤处理过的鱼体放入混合染液中进行染色2-3天，所述的混合染液由阿尔新蓝、浓度为95%的乙醇和冰醋酸混合而成，且阿尔新蓝与冰醋酸的质量体积比为1:200g/ml，而乙醇与和冰醋酸的体积比为80:20-75:25。4.根据权利要求1所述的鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其特征在于：所述的渗透压调整步骤为：将经过软骨染色步骤处理过的鱼体转移到浓度为95%的酒精中，1-2小时后更换一次酒精，再将鱼体依次分别在浓度为70%、40%和15%的酒精浸泡，每个浓度梯度浸泡时间均为2-3小时，最后将鱼体放入到蒸馏水中2-3小时，至标本下沉至蒸馏水底部。5.根据权利要求1所述的鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其特征在于：所述的酶解液浸泡步骤为：将经过渗透压调整步骤处理过的鱼体浸泡在酶溶液中，每2-3天更换一次酶溶液，或者在溶液变成蓝色时更换酶溶液，直到鱼体的硬骨和软骨均清晰可见，肌肉上的蓝色褪去，所述的酶溶液为胰蛋白酶、饱和的硼酸钠溶液和蒸馏水的混合物，其中胰蛋白酶、饱和硼酸钠溶液的质量体积比为1：30g/ml-2：30g/ml，饱和硼酸钠溶液与蒸馏水的体积比为3.0:7.0-3.5:6.5。6.根据权利要求1所述的鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其特征在于：所述的硬骨染色步骤为：将经过酶溶液浸泡处理后的鱼体移入茜素红染液中进行染色，浸泡时间为24小时，直至鱼体骨骼染成红色，所述的茜素红染液为茜素红与浓度为0.5%的KOH溶液的混合物，其中茜素红与KOH溶液的质量体积比为0.05:100g/ml。7.根据权利要求1所述的鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其特征在于：所述的二次透明处理步骤为：将经过硬骨染色步骤处理后的鱼体分别置于第一透明处理溶液和第二透明处理溶液中浸泡，浸泡时间均为3-4天，所述的第一透明处理溶液为甘油和浓度为0.5%的KOH溶液的混合物，且甘油和KOH溶液的体积比为1:3，所述第二透明处理溶液同样是甘油和浓度为0.5%的KOH溶液的混合物，且甘油和KOH溶液的体积比为1:1。8.根据权利要求1所述的鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法，其特征在于：所述的标本塑化步骤为：以浓度为0.5%的KOH溶液为母液，分别配置浓度为25%和50%的聚乙烯吡咯烷酮溶液，浓度为25%的聚乙烯吡咯烷酮溶液中聚乙烯吡咯烷酮和KOH溶液的质量体积比为25：100g/ml，浓度为50%的聚乙烯吡咯烷酮溶液中聚乙烯吡咯烷酮和KOH溶液的质量体积比为50：100g/ml，将经过二次透明处理的鱼体标本依次在浓度为25%的聚乙烯吡咯烷酮溶液中和浓度为50%的聚乙烯吡咯烷酮溶液中进行浸泡，每次浸泡时间均为5-6天，浸泡结束后，将鱼体标本进行自然风干9-1