黑曲霉孢子培养、分离和制备悬液的装置及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107384757A(43)申请公布日2017.11.24(21)申请号201710652637.2C12N1/02(2006.01)(22)申请日2017.08.02C12R1/685(2006.01)(71)申请人山东省食品药品检验研究院地址250101山东省济南市高新技术开发区新泺大街2749号药品检验所大楼1-101(72)发明人丁勃国明胡德福徐晓洁张冕胡文宏(74)专利代理机构济南泉城专利商标事务所37218代理人李桂存(51)Int.Cl.C12M1/12(2006.01)C12M1/00(2006.01)C12N1/14(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称黑曲霉孢子培养、分离和制备悬液的装置及方法(57)摘要本发明涉及微生物检测领域中的质控菌悬液制备，公开一种在封闭系统内进行黑曲霉孢子培养、分离和制备悬液的装置，包括，培养器，其下部装有琼脂培养基；富集器，设有罐体a，所述罐体a顶部连通有抽液软管，所述罐体a内设有截留菌丝使黑曲霉孢子通过的过滤膜a；所述罐体a下方设有罐体b，所述罐体b内设有截留、富集黑曲霉孢子的过滤膜b，所述罐体b底部设有排液口；蠕动泵，卡接抽液软管。同时公开了一种利用该装置的黑曲霉孢子培养、分离和制备悬液的方法。本发明充分分离菌丝和孢子，能制备出均匀、高浓度的黑曲霉孢子悬液，同时，在封闭的装置中，防止外界菌类污染孢子，也有效避免黑曲霉孢子对实验环境的污染和对实验人员的危害。CN107384757ACN107384757A权利要求书1/1页1.一种黑曲霉孢子培养、分离和制备悬液的装置,其特征在于，包括，培养器，其顶部设有换气口（1）和进出液口（2），其下部装有琼脂培养基（4）；富集器，设有罐体a（9），所述罐体a（9）顶部连通有抽液软管（7），所述抽液软管（7）的管口与进出液口（2）连通，所述罐体a（9）内设有截留菌丝使黑曲霉孢子通过的过滤膜a（10）；所述罐体a（9）下方设有罐体b（13），所述罐体b（13）顶部通过软管（12）与罐体a（9）底部连通，所述罐体b（13）内设有截留、富集黑曲霉孢子的过滤膜b（14），所述罐体b（13）底部设有排液口（16）；蠕动泵（17），卡接抽液软管（7）。2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述过滤膜a（10）材质为聚丙烯，所述过滤膜a（10）厚度为45~55mm，所述过滤膜a（10）为非对称膜，所述过滤膜a（10）滤孔孔径从上到下减小，所述过滤膜a（10）滤孔孔径为5～10um。3.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述过滤膜b（14）为混合纤维素滤膜，所述过滤膜b（14）滤孔直径为0.22~0.45um。4.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述培养基（4）上端面是4~7度的倾斜面（5）；所述培养基（4）上面覆盖有混合纤维素膜（3）；所述混合纤维素膜（3）滤孔直径为0.22~0.45um。5.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述换气口（1）内设有滤芯。6.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述进出液口（2）下端连接有导液管，所述导液管贴在培养器内壁，所述导液管管口位于滤膜a（10）上方2~5mm处，所述进出液口（2）上端连接有卡套式通管接头，所述通管接头的管口设有开关。7.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述罐体b（13）顶部设有排气口（8），所述排气口（8）内设有滤芯。8.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述培养器材质为聚乙烯；所述富集器材质为聚乙烯和聚丙烯；所述罐体a（9）下方通过3~5根可剪断的支柱（11）固定罐体b（13）。9.一种使用如权利要求1所述的装置进行黑曲霉孢子培养、分离和制备悬液的方法，其特征在于，a将已接种黑曲霉孢子的培养器置20~25℃培养箱中培养5~7天，待培养基表面产生大量孢子后取出；b将取液器抽取含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌生理盐水40~50ml，自进出液口加入培养器中，振摇，洗脱孢子；c将富集器抽液软管固定于蠕动泵，将抽液软管口密封连通培养器进出液口，开启蠕动泵定向加压，使培养器内的孢子、菌丝悬液被抽取至富集器内，罐体a内的过滤膜a将菌丝截留，孢子悬液通过软管进入罐体b，过滤膜b可截留孢子，生理盐水自排液口排出；d另取含孢子的培养器，重复b、c步骤，在过滤最后一个培养器内的孢子悬液之前，堵塞第二罐体的排液口，则液体存留于第二罐体内，用导管夹夹紧软管中段，从上端剪断，振摇罐体，充分混匀，制成黑曲霉孢子悬液。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤d中，过滤最后一个培养皿内液体时，不堵塞罐体b的排液口，将生理盐水全部排除，分离罐体b后，从软管加入无菌生理