一种人食管癌细胞系及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107541496A(43)申请公布日2018.01.05(21)申请号201610495383.3C12Q1/02(2006.01)(22)申请日2016.06.27A01K67/027(2006.01)A61K49/00(2006.01)(83)生物保藏信息C12R1/91(2006.01)CCTCCNO:C2016612016.04.13(71)申请人安徽省立医院地址230001安徽省合肥市庐江路9号申请人上海睿智化学研究有限公司(72)发明人徐美青郭明发柳常青戎保林梅新宇田界勇葛晓梅顾莹谢付波李利孙丽丽李富周禾(74)专利代理机构上海弼兴律师事务所31283代理人薛琦沈利(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书7页C12N5/09(2010.01)序列表5页附图7页(54)发明名称一种人食管癌细胞系及其应用(57)摘要本发明公开了一种人食管癌细胞系及其应用。该人食管癌细胞保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C201661。该人食管癌细胞系在保留主要临床生物学特征的前提下，具有成瘤率高，潜伏期短，均一性好等特点，丰富了人食管癌细胞库，为基于中国人群遗传背景开展的研究提供了有力的科研资料，也为新药临床前研究体内体外实验提供新的试验材料。CN107541496ACN107541496A权利要求书1/1页1.一种人食管癌细胞，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C201661。2.如权利要求1所述的人食管癌细胞的子代细胞。3.如权利要求1或2所述的人食管癌细胞的用途，其特征在于，用于制备在非人类的哺乳动物中产生食管癌肿瘤的试剂。4.如权利要求3所述的人食管癌细胞的用途，其特征在于，所述的哺乳动物为免疫缺陷小鼠。5.如权利要求4所述的人食管癌细胞的用途，其特征在于，所述的免疫缺陷小鼠为免疫功能重建的免疫缺陷小鼠。6.如权利要求4所述的人食管癌细胞的用途，其特征在于，所述的免疫缺陷小鼠包括裸小鼠或SCID鼠。7.一种如权利要求1或2所述的人食管癌细胞的建立方法，其特征在于，包括以下步骤，1)获得新鲜的临床食管癌手术切除标本，切成20～50mg的小块，皮下穿刺接种哺乳动物；2)穿刺接种70～90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。8.如权利要求7所述的方法，进行所述皮下穿刺接种前，所述的新鲜的临床人食管癌切除标本用HBSS缓冲液漂洗，所述的HBSS缓冲液包括500U/ml的青霉素G、500μg/ml的硫酸链霉素和1.25μg/ml的两性霉素B；所述的原代培养方法包括以下步骤：将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37℃孵箱下培养；次日，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加PC-1培养液，静置培养；待细胞铺展到占培养瓶表面70％满时进行传代培养和纯化；所述传代培养包括以下步骤：吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的0.05％胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，向瓶内加入新鲜的PC-1培养液，当细胞传代到第十代以后，将培养液更换为RPMI1640培养液，所述RPMI-1640培养液包含10％(w/w)胎牛血清、10μg/mL青霉素G和2μM氢化可的松，所述百分比为质量百分比；所述纯化的方法为差速贴壁。9.一种筛选治疗食管癌候选药物的体内实验方法，其特征在于，其包括以下步骤：将测试化合物施用于动物模型，施用后导致食管癌症状改善或治愈的测试化合物就是治疗食管癌候选化合物，所述的动物模型具有权利要求1或2所述的人食管癌细胞所导致的食管癌肿瘤。10.一种筛选治疗食管癌候选药物的体外实验方法，其特征在于，其包括以下步骤：将测试化合物以不同浓度直接施用于权利要求1或2所述的人食管癌细胞，根据对肿瘤细胞增殖的抑制效果，判断测试化合物对食管癌的抗肿瘤能力。2CN107541496A说明书1/7页一种人食管癌细胞系及其应用技术领域[0001]本发明属于细胞系领域，特别涉及一种人食管癌细胞系及其应用。背景技术[0002]食管癌是指从下咽部至食管胃结合之间食管上皮来源的恶性肿瘤。食管癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，但发病水平高低相差悬殊，有明显的地域特征性。我国尤其是食管癌的高发国家，其发病率和死亡率均居世界之冠。据统计，全世界每年大约有20余万人死于食管癌，其中我国每年死于食管癌者约15万人，占全世界的四分之三。在我国，食管癌中95％以上是鳞状细胞癌，少数为起源于食管腺体或异位胃粘膜的腺癌，偶见有腺鳞癌或腺棘癌。[0003]食管癌早期症状常不明显，但在吞咽粗硬食物时可能有不同程度的不适感觉，包括咽下食物梗噎感，胸骨后烧灼样、针刺样或牵拉摩擦样疼痛。中晚期典型的症状为进行性咽下困难，先是难咽干的食物，继而是半流质食物，