一种检测动物源性食品中兽药残留的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107576744A(43)申请公布日2018.01.12(21)申请号201710909841.8(22)申请日2017.09.29(71)申请人沈阳出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心地址110000辽宁省沈阳市沈河区东滨河路106号(72)发明人赵颖刘瑜吴渺渺李晓东姜玲玲徐宜宏金雁张彤(74)专利代理机构北京弘权知识产权代理事务所(普通合伙)11363代理人逯长明许伟群(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书3页说明书28页附图1页(54)发明名称一种检测动物源性食品中兽药残留的方法(57)摘要本发明公开了一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，采用改进的QuEChERS试剂盒方法进行样品前处理，具有简单快速、高效省力、重现性好而且低试剂消耗、低劳动强度、低成本、环境友好等优点，同时配合UPLC-MS/MS-Qtrap检测方法可实现十四类82种兽药的同时筛查、确证分析，进而实现了多种类兽药的高通量分析检测。CN107576744ACN107576744A权利要求书1/3页1.一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)样品前处理：称取样品放置于萃取管中，并加入体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液涡旋振荡，加入盐包后均质提取，离心；取上清液置于净化管中进行净化、浓缩、定容后，备用；2)定性分析：运用UPLC-MS/MS-Qtrap法对经过样品前处理的待检测动物源性食品样品进行筛查，采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的增强子离子扫描功能，建立MRM-IDA-EPI筛查方法，获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS2谱图，用已知数据库中各兽药的标准MS2谱图与获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS2谱图分别进行对比后，获得相似度值，并且匹配两者的特征碎片离子，进而判断待检测动物源性食品样品中是否含有目标兽药；3)定量分析：分别称取各兽药标准品，依据相似相溶原理选择溶剂分别配制1mg/mL的标准储备液，备用；按照步骤1)中的样品前处理方法对空白样品进行处理后，用空白样品基质溶液稀释标准储备液，制成混合标准储备溶液；将混合标准储备溶液定容后，得到空白样品基质溶液，配制浓度为0.5ng/mL～80ng/mL的系列匹配标准工作溶液；采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪对系列匹配标准工作溶液和经过样品前处理的待检测动物源性食品样品分别进行测定，获得以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标的绘制标准曲线，以此标准曲线来计算待检测动物源性食品样品中目标兽药的残留量。2.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述兽药为阿苯哒唑、苯硫氨酯、左旋咪唑、芬苯哒唑、地昔尼尔、盐霉素、莫能菌素、氯羟吡啶、三氯苯哒唑、吡喹酮、丙氧苯咪唑、依诺沙星、洛美沙星、麻保沙星、司帕沙星、奥比沙星、氟罗沙星、吡哌酸、西诺沙星、米洛沙星、恩诺沙星、氟甲喹、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、噁喹酸、沙拉沙星、达氟沙星、培氟沙星、磺胺甲噻二唑、苯酰磺胺、磺胺吡唑、磺胺索嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺噻唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺醋酰、林可霉素、替米考星、克林霉素、罗红霉素、红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、交沙霉素、北里霉素、土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑、氯丙嗪、甲基睾丸酮、醋酸甲孕酮、地塞米松、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、西马特罗、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、乙烯雌酚、孔雀石绿、隐色孔雀石绿以及金刚烷胺中的一种或多种。3.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述步骤1)样品前处理具体为：称取样品5.00g放置于盛装有硫酸铵的50mL萃取管中，并加入20mL体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液，于漩涡混合器上涡旋振荡3min，将盐包中的盐全部加入萃取管中，均质提取2CN107576744A权利要求书2/3页1min，以5000r/min离心5min；用针筒净化器抽取上清液于净化管中，插入堵头，涡旋混匀1min，以5000r/min离心3min，取5mL上清液，40℃条件下浓缩至干，加入1.0mL体积浓度为20％的甲醇水溶液溶解残渣，过0.2μm滤膜，备用。4.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述步骤2)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正/负离子扫描；采集模式：多反应监测；