预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共15页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107641604A(43)申请公布日2018.01.30(21)申请号201710461602.0(22)申请日2017.06.14(71)申请人天津科技大学地址300457天津市经济技术开发区第十三大街29号(72)发明人肖冬光郝爱丽董健付肖蒙郭学武张翠英(51)Int.Cl.C12N1/19(2006.01)C12P7/06(2006.01)C12R1/865(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表3页附图4页(54)发明名称一株耐高温酿酒酵母菌株及其构建方法(57)摘要本发明公开了一株耐高温酿酒酵母菌株及其构建方法,属于生物工程技术领域。本发明通过在亲本酿酒酵母菌株中,完全敲除Ras/cAMP/PKA信号通路中的SCH9基因,该基因编码的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Sch9与PKA的催化亚基具有高度同源性,故敲除SCH9基因会对PKA活性造成影响,PKA活性降低,有利于提高细胞的压力抗性。同时选用酵母体内固有的URA3基因作为筛选标记,避免了外源基因的残留。获得的耐高温酿酒酵母菌株48h细胞存活率、CO2失重和乙醇产量都较亲本菌株有所提高,残糖含量有所下降,其中AY12a-SCH9Δ转化子2a的乙醇产量相对亲本菌株提高了16.4%,说明AY12a-SCH9Δ的转化子2a是耐高温酿酒酵母菌株,该耐高温酿酒酵母菌株在浓醪发酵中具有广泛的应用前景。CN107641604ACN107641604A权利要求书1/1页1.选育出的高耐受酿酒酵母菌株,是在酿酒酵母出发菌株中敲除SCH9基因获得。2.如权利要求1所述的高耐受酿酒酵母菌株,其特征在于,所述出发菌株为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)CICC32315。3.如权利要求1所述的高耐受酿酒酵母菌株,其特征在于,所述酿酒酵母具有正常的生长性能,对55℃热激以及8%(v/v)乙醇都有一定的耐受性,并在38℃玉米原料高温浓醪发酵中乙醇产量相对亲本菌株提高了16.4%。4.如权利要求1所述的高耐受酿酒酵母菌株的构建方法,其特征在于,所述构建方法是通过长引物敲除法,以酵母体内固有的URA3基因作为筛选标记,避免了外源基因的残留。5.如权利要求4所述的高耐受酿酒酵母菌株的构建方法,其特征在于,具体步骤包括:本研究以SCH9基因作为靶序列,以提供的酿酒酵母工业菌株为出发菌株,以酵母体内固有的URA3基因作为筛选标记。使用带有待敲除基因SCH9的40bp同源序列和带有URA3基因的19bp同源序列的长引物进行PCR扩增得到带有同源臂的片段,将重组片段利用醋酸锂转化法导入到感受态酿酒酵母细胞中,通过与酵母染色体上的同源序列发生重组,经抗性板筛选出转化子,通过PCR全长验证得到AY12a-SCH9Δ突变菌株,即URA3基因替代了酵母染色体上的SCH9基因,从而实现了SCH9基因的敲除。将AY12a-SCH9Δ与AY12α进行回交融合,然后再生孢分离单倍体,即获得新的AY12a-SCH9Δ突变株及AY12α-SCH9Δ突变株。6.如权利要求2所述的耐高温酿酒酵母菌株在乙醇生产中的应用。2CN107641604A说明书1/6页一株耐高温酿酒酵母菌株及其构建方法技术领域:[0001]本发明涉及基因工程领域,具体是涉及一株耐高温酿酒酵母菌株及其构建方法。背景技术:[0002]现今,乙醇的作用在生活中随处可见,且利用酿酒酵母的优势菌种生产乙醇的发酵工艺也已十分成熟。Casey等人最早提出浓醪发酵(veryhighgravityfermentation)的概念,即每100g发酵液中含有大于等于18g可溶性固形物的发酵。由于提高了原料初始浓度,乙醇的最终浓度也得到大幅度的提高。另外,发酵过程中积累的乙醇能抑制杂菌的生长及代谢,使设备的利用率有效提高,减少了发酵及蒸馏过程中的能量投入,从而使发酵成本降低、利润提高,故浓醪发酵工艺受到了广泛关注。[0003]随着浓醪发酵工艺的广泛应用,也给酿酒酵母的耐受性提出很高的要求。在浓醪发酵的初期,酵母细胞受高糖浓度(高渗透压浓度)抑制,细胞生长发育缓慢甚至停止。发酵结束时,高浓度的乙醇浓度虽在一定程度上能抑制杂菌的生长与代谢,但此时也有可能释放某种毒性物质并对酵母细胞生长产生抑制,导致酿酒酵母细胞生长缓慢或死亡,进而减弱发酵菌株的呼吸作用,降低发酵代谢水平。另外,在发酵过程中虽使用冷凝水,但冷凝水的流速不会随着发酵时间而改变,主发酵期热量产生过多,而不能被冷凝水及时带走,就可能使发酵罐罐体中发酵液温度过高,从而造成酵母细胞的存活率及发酵性能的降低。这些胁迫环境都会影响到最终的乙醇产量,因此,提高酵母菌种的耐受性,可提高菌种的发酵性能,降低发酵过程中能量消耗,从而提高生产