工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107936033A(43)申请公布日2018.04.20(21)申请号201711035176.0(22)申请日2017.10.30(71)申请人福建医科大学地址350004福建省福州市台江区交通路88号(72)发明人俞昌喜石冬梅许盈苏燕评何灿强(74)专利代理机构福州智理专利代理有限公司35208代理人王义星(51)Int.Cl.C07D491/22(2006.01)B01D15/10(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图2页(54)发明名称工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法(57)摘要本发明公开一种工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，包括以下步骤：制备体积浓度在10-90%有机溶剂的水溶液的流动相；制备钩吻素子样品的溶液；选用正相或反相硅胶用异丙醇匀浆得匀浆液，将匀浆液倒入动态轴向压缩柱，排除流动相后压实正相或反相硅胶色谱填料；将钩吻素子样品溶液注入平衡后的动态轴向压缩柱，流动相洗脱；用紫外检测器在线检测样品分离情况，根据保留时间和色谱峰的高度确定所制备钩吻素子的收集起止时间；将收集到的钩吻素子单体溶液减压浓缩，除去溶剂，得到高纯度的钩吻素子单体；钩吻素子单体酸化成盐后扩大适用范围。采用本发明分离纯化钩吻素子，获得高效液相色谱法检测纯度在99%以上的单体，样品得率95%以上。CN107936033ACN107936033A权利要求书1/1页1.一种工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，包括以下步骤（1）制备流动相：流动相溶剂体系为有机溶剂的水溶液，体积浓度在10-90%；（2）制备样品的溶液：将钩吻素子粗品用有机溶剂或有机溶剂-水溶液溶解，采用有机滤膜对样品溶液过滤；（3）选用色谱填料：正相或反相硅胶；（4）填装动态轴向压缩柱：将色谱填料用异丙醇匀浆得匀浆液，将匀浆液倒入动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱填料，用步骤（1）配制的流动相冲洗2~3个柱体积，直到色谱仪检测的色谱基线平稳，至平衡状态，完成动态轴向压缩柱的填装；（5）洗脱分离钩吻素子：将步骤（2）的样品注入步骤（4）平衡后的动态轴向压缩柱，流动相洗脱；用紫外检测器在线检测样品分离情况，根据保留时间和色谱峰的高度确定所制备钩吻素子的收集起止时间；（6）浓缩钩吻素子：将步骤（5）收集到的钩吻素子单体溶液减压浓缩，除去溶剂，得到高纯度的钩吻素子单体；钩吻素子单体酸化成盐后扩大适用范围。2.根据权利要求1所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，其特征是步骤（1）所述的洗脱溶剂系统的有机溶剂包括但不仅是甲醇或乙腈。3.根据权利要求1或2所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，其特征是步骤（2）所述的钩吻素子粗品用有机溶剂或有机溶剂-水溶液溶解后，采用有机滤膜对样品溶液过滤。4.根据权利要求1或2所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，其特征是所述的钩吻素子经适合的酸溶液酸化处理，重结晶可得相应的钩吻素子盐。其中所述钩吻素子盐选自盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐，优选是盐酸盐。5.根据权利要求1或2所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，其特征是步骤（3）中的动态轴向压缩柱的色谱系统。6.根据权利要求2或3所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，其特征是有机溶剂优选甲醇。7.根据权利要求1或2所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，其特征是流动相为甲醇-水。2CN107936033A说明书1/3页工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法技术领域[0001]本发明涉及钩吻素子的产业化制备方法，具体是涉及工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法。背景技术[0002]钩吻（GelsemiumelegansBenth.）为马钱科胡蔓藤属常绿木质藤本植物，全株入药。可用于治疗各类疼痛，尤其慢性神经性疼痛与癌性疼痛。钩吻的主要有效成分为吲哚类生物碱，其中含量最高的为钩吻素子，钩吻素子具有显著的镇痛、抗焦虑等功效，有望开发成具有自主知识产权的1类新药。[0003]目前分离纯化钩吻素子的技术主要有硅胶柱层析法（专利号：201110081565.3，公开日2012年10月17日）和高效逆流色谱法（专利号：200810071469.9，公开日2008年12月17日）。硅胶柱层析法采用氯仿-甲醇梯度洗脱，对设备性能要求高，溶剂用量大、毒性强，样品回收率低，所得钩吻素