离子色谱法测定研究.docx

离子色谱法测定研究《中国测试杂志》2014年第三期1实验部分1.1仪器及试剂ISC-2000离子色谱仪（美国戴安公司）；Ion－PacAS19色谱柱（美国戴安公司）；AnkeTGL-10B高速离心机；HR2168搅拌器；JJ600型电子天平；万用电热器；漩涡混合器。焦磷酸钠、三聚磷酸钠、六偏磷酸钠（分析纯国药集团化学试剂有限公司）；三氯甲烷、三氟乙酸、三氯乙酸均为色谱纯；NaOH、乙酸铅为分析纯；水为18.25MΩ•cm的去离子水。1.2样品前处理准确称量1.00g样品于50mL离心管中同时加入20mL沸水涡旋振荡1min以4000r/min的转速离心5min取上层清液2mL于10mL玻璃离心管中加入2mL三氯甲烷涡旋振荡1min以4000r/min的转速离心5min取上层水相过滤（0.22μm滤膜）。吸取滤液于离子色谱仪中进行检测。1.3色谱分析条件色谱柱：IonPacAS19（4mm×250mm×7μm）；保护柱：IonPacAG19（4mm×50mm）；柱温：30℃；抑制器电流：245mA；电导检测方式；淋洗液流速：1.00mL/min；KOH梯度淋洗：25mmol/LKOH淋洗液淋洗5min后在10min内将KOH淋洗液从25mmol/L增至99mmol/L99mmol/LKOH淋洗液淋洗3min后在2min内将KOH淋洗液降至25mmol/L。1.4标准曲线的绘制用分析天平分别准确称取0.01g焦磷酸钠、三聚磷酸钠、六偏磷酸钠用去离子水定容配制成焦磷酸钠与三聚磷酸钠浓度为1.005.0010.020.050.0100.0mg/L六偏磷酸钠浓度为10.0050.00100.0200.0500.01000.0mg/L的混合标准溶液将溶液注射至离子色谱仪进样分析。以待测物的峰面积Y（μS•min）对浓度X（mg/L）做标准曲线。2结果与讨论2.1沉淀剂的选择本实验主要采用离子色谱法测定肉制品中焦磷酸盐、三聚磷酸盐、六偏磷酸盐这3种磷酸盐。为了达到最佳检测效果提高方法的回收率首先对样品前处理方法和色谱条件进行优化。在前处理过程中采用直接加入沸水提取分别采用三氯乙酸、乙酸铅、NaOH、三氟乙酸、三氯甲烷作为沉淀剂以去除样品中的蛋白质及盐分。结果显示采用三氯乙酸时三氯乙酸与焦聚磷酸盐的出峰时间相近可能会形成共淋洗对多聚磷酸盐的色谱峰产生干扰而且三氯乙酸具有较强的致癌性；采用乙酸铅时出现较多杂峰而且可能在前处理过程中多聚磷酸盐与蛋白质形成共沉淀加入的混合标准多聚磷酸盐未被检测出来；采用NaOH时样品中的蛋白质未去除；采用三氟乙酸时混合液较混浊影响色谱峰峰形；而采用三氯甲烷时回收率较高出峰效果好而且与水相的分层明显无杂质干扰（见色谱图1）。因此本实验最终选取三氯甲烷作为沉淀剂来展开后续工作。在本实验中采用溶剂去除蛋白质后曾尝试用固相萃取（SPE）基质净化技术进一步去除蛋白质以及盐分但实验表明该步骤对色谱图基本没影响因此为简化操作步骤在前处理过程中不进行此操作步骤。2.2色谱柱及淋洗条件的选择本实验选取IonPacAS11柱和IonPacAS19柱分别进行多聚磷酸盐的检测实验表明选用IonPacAS11柱时峰形较差拖尾严重而且检测时间较长；选用IonPacAS19时线性范围宽色谱图效果好。这是由于虽然这两种色谱柱填料相同但IonPacAS11柱是一款低容量氢氧根体系阴离子交换色谱柱Ion－PacAS19柱是以氢氧化物为淋洗液的高容量阴离子交换柱而且阴离子交换树脂的涂层是由环氧树脂单体和有机胺合成从基质上直接产生这种聚合物亲水性非常好对OH-淋洗液选择性很好。因此本实验最终选取IonPacAS19柱。淋洗液的浓度是影响分离的重要因素。淋洗液浓度大各组分离子保留时间短整个实验分析时间短但可能会出现各组分被同时洗脱的现象。而当淋洗液浓度小时实验的分析时间长而且可能会出现严重的拖尾。实验尝试使用等度淋洗和梯度淋洗。进行等度淋洗时由于各组分的保留时间不同最适宜的淋洗液浓度条件不同不能达到有效的分离。进行梯度淋洗时通过梯度淋洗可调整组分的保留时间设置1.3节里的梯度淋洗浓度得到了较为理想的色谱图（见图2）峰形好。因此本实验最终按1.3节里的梯度淋洗浓度条件进行梯度淋洗。2.3方法的线性范围及检出限在优化的实验条件下将一系列浓度的混合标准溶液依次进样以峰面积（Y）对浓度（X）进行线性拟合3种多聚磷酸盐的线性关系良好（见图3）各化合物的标准曲线、线性范围、方法检出限（n=10S/N=3）见表1。2.4方法的回收率及精密度测试应用所建立的方法在空白的猪肉和鸡肉样品中添加多聚磷酸盐的混合标准溶液对3种磷