基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108318692A(43)申请公布日2018.07.24(21)申请号201810036906.7(22)申请日2018.01.15(71)申请人吉林大学地址130012吉林省长春市前进大街2699号(72)发明人乔尚娜张鸣镝孙春燕黄楚君耿永兴刘秋丽沈旭(74)专利代理机构长春市恒誉专利代理事务所(普通合伙)22212代理人李荣武(51)Int.Cl.G01N33/58(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图3页(54)发明名称基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素(57)摘要基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，属于分析化学技术领域；其特征在于利用核酸适配体的特异性识别和荧光共振能量转移技术的优势来检测卡那霉素的残留量。包括以下步骤：核酸适配体结构开关的组装；利用温度变化验证结构开关原理的形成；通过测定荧光光谱图观察卡那霉素和核酸适配体结构开团体系的反应；建立基于核酸适配体的结构开关检测卡那霉素；通过测定荧光光谱图测定所建立的核酸适配体结构开关对卡那霉素的选择性；运用所建立的核酸适配体的结构开关测定实际样品中的卡那霉素。本方法提供了一种对卡那霉素有高选择性，同时又简单、快速、灵敏的检测方法，具有良好的实用价值，便于推广。CN108318692ACN108318692A权利要求书1/1页1.基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，其特征是利用核酸适配体的特异性识别和荧光共振能量转移技术的优势来检测卡那霉素的残留量，包括以下步骤：建立基于核酸适配体的结构开关检测卡那霉素；通过测定荧光光谱图测定所建立的核酸适配体结构开关对卡那霉素的选择性；运用所建立的核酸适配体的结构开关测定实际样品中的卡那霉素。2.如权利要求1所述的基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，其中基于核酸适配体的结构开关检测卡那霉素的步骤如下：向含有0.5μM核酸适配体50μL，1μM互补链50μL，PH8.0Tris-HCl缓冲溶液350μL的混合体系中，分别加入不同浓度的卡那霉素标准溶液，室温条件下反应20min后，测定该体系的荧光强度，其荧光信号值将随着卡那霉素浓度的不同而发生变化，根据F2-F1与卡那霉素的浓度建立标准曲线，卡那霉素的检出限为12.01nM，线性范围为100-700nM。3.如权利要求1所述的基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，其中通过测定荧光光谱图测定所建立的核酸适配体结构开关对卡那霉素的选择性的步骤如下：选择实际样品中易出现残留的与卡那霉素相似的抗生素进行了选择性实验，分别为链霉素、氯霉素、四环素、土霉素、环丙沙星；首先，分别将卡那霉素、链霉素、氯霉素、四环素、土霉素、环丙沙星的标准溶液稀释到5μM；其次，将上述5μM抗生素溶液各吸取50μL分别加入到含有0.5μM核酸适配体50μL，1μM互补链50μL，PH8.0Tris-HCl缓冲溶液350μL的体系中，涡旋混合20min后测定荧光值，结果显示只有加入卡那霉素的体系出现荧光恢复的情况，说明该结构开关体系对于实际样品中卡那霉素的检测具有较好的选择性。4.如权利要求1所述的基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，其中运用所建立的核酸适配体的结构开关测定实际样品中的卡那霉素的步骤如下：取4mL的牛奶加入到15mL的离心管中，加入6mL的三重蒸馏水进行稀释后加入2mL10％的三氯乙酸和2mL氯仿，涡旋混合1min后，在温度为20℃的条件下超声15min；然后，将上述溶液以13000转/分钟的转速离心10min，吸取上清液转移至另一个15mL的离心管中，再以10000r/min的转速离心10min，吸取上清液，稀释20倍后备用；然后，加入不同浓度的卡那霉素标准溶液，按照权利要求2所述的方法，进行测定；根据F2-F1与卡那霉素的浓度建立工作曲线，卡那霉素的检出限为13.07nM，线性范围为100-600nM。2CN108318692A说明书1/5页基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素技术领域[0001]基于核酸适配体的特异性识别和荧光共振能量转移(FRET)检测卡那霉素的方法，属于分析化学技术领域。背景技术[0002]卡那霉素是一种提取于链霉菌、小单胞菌培养液或以天然品为原料半合成提取而得到的碱性氨基糖苷类抗生素。卡那霉素溶于水，对革兰氏阴性杆菌具有较强作用，同时价格便宜、可在临床上作为一种重要的抗感染药物。在目前，卡那霉素也是我国农业、畜牧业以及水产业中常用的兽药之一。由于动物源性食品中的卡那霉素可在人体内蓄积，对人体造成一定程度的伤害，因此我国对卡那霉素的残留问题也越来越关注。其中卡那霉素最重要的不良反应是会影响耳蜗神经，从而诱发耳毒症，造成听力损伤。此外，卡那霉素也对肾脏有着一定损伤，导致肾功能衰竭。为保障人类健康