一种生物制品疫苗甲醛残留量的测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108426847A(43)申请公布日2018.08.21(21)申请号201810276527.5(22)申请日2018.03.30(71)申请人吉林冠界生物技术有限公司地址134000吉林省通化市梅河口市曙光镇罗家村(72)发明人付春杰李莉金燕斌陈宏朱长动宋海岩张丹石莹孟令伟张丽娜杨柳杜鑫高晓庆唐东雪王博程杰曾晓敏刘金伟(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人齐云(51)Int.Cl.G01N21/33(2006.01)权利要求书2页说明书14页(54)发明名称一种生物制品疫苗甲醛残留量的测定方法(57)摘要本发明涉及一种生物制品疫苗甲醛残留量的测定方法。所述方法包括a)供试品溶液配制；b)对照品溶液配制；c)将对照品溶液、供试品溶液分别加醋酸-醋酸铵缓冲液、乙酰丙酮试液，置水浴锅恒温水浴，冷水冷却后测定吸光度计算即得；所述方法还包括测定结果的不确定度评定方法，包括：按照下述公式计算测定结果的合成标222准不确定度：u＝[u(供试品)+u(对照品)+u(甲醛标定)+221/2u(醋酸-醋酸铵)+u(乙酰丙酮)]；甲醛残留量测定的扩展不确定度＝2u。本方法提供了规范化的疫苗产品甲醛残留量的测定方法，并提供了其不确定度的分析方法。该不确定度的分析方法主要用于评价不同实验室间检测能力。CN108426847ACN108426847A权利要求书1/2页1.一种生物制品疫苗甲醛残留量的测定方法，其特征在于，包括：a)用5.0ml刻度移液管取被检疫苗样品5.0ml，置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，强烈振摇，静止分层，下层液如果不澄清，滤过，弃去初滤液，取澄清续滤液，得到供试品溶液；b)用刻度移液管取已标定的甲醛溶液配成每l.0ml含甲醛1.0mg的溶液，精密量取上述稀释溶液5.0ml置50ml容量瓶中，用10ml刻度移液管加20％吐温-80乙醇溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，得到对照品溶液；其中，步骤a)和b)无先后顺序；c)用1.0ml刻度移液管精密吸取所述供试品溶液和所述对照品溶液各0.5ml，分别加醋酸-醋酸铵缓冲液10ml、乙酰丙酮试液10ml，置60℃水浴锅恒温水浴15分钟，冷水冷却5分钟，放置20分钟后，按紫外-可见分光光度法《中华人民共和国兽药典》附录，用紫外分光光度计在410nm的波长处测定吸收度，计算即得；计算公式为：甲醛溶液(40％)含量％(g/ml)＝0.0025×(供试品溶液的吸收度÷对照品溶液的吸收度)×100％；所述方法还包括测定结果的不确定度评定方法，包括如下步骤：按照下述公式计算测定结果的合成标准不确定度：222221/2u＝[u(供试品)+u(对照品)+u(甲醛标定)+u(醋酸-醋酸铵)+u(乙酰丙酮)]；式中，u(供试品)、u(对照品)、u(甲醛标定)、u(醋酸-醋酸铵)、u(乙酰丙酮)分别对应供试品溶液配制与检测、对照品溶液配制与检测、甲醛溶液标定、醋酸-醋酸铵缓冲液配制、乙酰丙酮试液配制产生的不确定度分量；甲醛残留量测定的扩展不确定度＝2u。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤a)中，当所述被检疫苗样品为油乳剂疫苗时，在用5.0ml刻度移液管取被检疫苗样品5.0ml，置50ml量瓶中之后、加水稀释至刻度之前还包括：用20％吐温-80乙醇溶液l0ml，分次洗涤吸管，洗液并入50ml量瓶中，摇匀。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液配制与检测产生的不22221/2确定度分量u(供试品)＝[u(样稀释)+u(样测定)+u(z)+u(s)]；其中，式中u(z)为所述紫外线分光光度计引入的不确定度分量；u(s)为所述水浴锅引入的不确定度分量；u(样稀释)为被检疫苗样品稀释至50ml容量瓶时引入的不确定度分量；u(样测定)为在步骤c)中对被检疫苗样品进行测定时引入的不确定度分量。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品溶液配制与检测产生的不确定22221/2度分量u(对照品)＝[u(对照稀释)+u(对照测定)+u(z)+u(s)]；其中，式中u(z)为所述紫外线分光光度计引入的不确定度分量；u(s)为所述水浴锅引入的不确定度分量；u(对照稀释)为用刻度移液管取已标定的甲醛溶液配成每l.0ml含甲醛1.0mg的溶液，精密量取上述稀释溶液5.0ml置50ml容量瓶中时引入的不确定度分量；u(对照测定)为在步骤c)中对对照品进行测定时引入的不确定度分量。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤b)中，所述甲醛溶液的标定方法为：取甲醛溶液约1.5ml，采用去皮法精密称定，置锥形瓶中，加水10ml，与溴麝香草酚蓝指示液2滴，滴加1.0mol/