一种检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108535474A(43)申请公布日2018.09.14(21)申请号201810217657.1(22)申请日2018.03.16(71)申请人北方工业大学地址100144北京市石景山区晋元庄路5号申请人张静王晓磊(72)发明人张静王晓磊(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/533(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图1页(54)发明名称一种检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条及其应用(57)摘要本发明公开了一种检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫，反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端；样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有氯菊酯时间时间分辨荧光微球；反应膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)，T线接上包被氯菊酯抗原(包被原)，C线包被抗兔抗体。本发明还提供了一种应用上述氯菊酯试纸条检测苹果、玉米、茶叶、西红柿、菠菜、白菜等样品中氯菊酯残留的方法。本发明所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、定量检测、快速检测、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。CN108535474ACN108535474A权利要求书1/2页1.一种检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条，包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫，其特征在于所述反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端；所述样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有氯菊酯时间时间分辨荧光微球；所述反应膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)，T线接上包被氯菊酯抗原(包被原)，C线包被抗兔抗体，所述氯菊酯抗原是氯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物，所述氯菊酯半抗原的制备方法如下：(1)将24.3g3-(4-硝基苯氧基)苯甲醛溶于100ml无水甲醇中，室温搅拌溶解，分批加入硼氢化钠0.4g，室温反应5h，蒸干溶剂，柱层析纯化，得到23.3g芳香醇目标物，收率95％；(2)将步骤一中得到的芳香醇24.5g加入到100ml三氯甲烷中，室温搅拌溶解，加入Py8.5g，于室温下滴加含有22.6g二氯菊酰氯的30ml三氯甲烷溶液；滴加完毕，室温继续反应5h，蒸干溶剂，柱层析纯化，得到菊酯目标物39.2g，收率90％；(3)将步骤二所得的菊酯化合物43.5g，加入到120ml无水甲醇中，室温溶解，倒入加氢釜中，加入Pd/C3g，加1个大气压，室温反应6h，过滤除去Pd/C，减压去溶剂，得到氨基目标物36.5g，收率90％；(4)将步骤三所得氨基化合物40.5g加入到200ml三氯甲烷中，室温搅拌溶解；加入1g对甲基苯磺酸，加入琥珀酸酐12g，室温搅拌反应过夜；蒸干溶剂，柱层析纯化得到含羧基的半抗原目标物43g，收率85％。2.如权利要求1所述的检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条，其特征在于所述氯菊酯半抗原的分子结构式为：3.如权利要求1所述的检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条，其特征在于所述氯菊酯时间分辨荧光微球，包括检测微球和质控微球，检测微球为表面包被有氯菊酯单克隆抗体的荧光微球，质控微球为表面包被有兔抗标记蛋白的荧光微球。4.如权利要求1所述的检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条，氯菊酯单克隆抗体是以氯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述免疫原的制备方法如下：将133mgBSA溶于5ml0.01MPBS，搅拌溶解；氯菊酯半抗原与BSA比例可在1∶1～60∶1的范围内调整，本申请选择在加入50mg氯菊酯半抗原(与BSA摩尔比为50∶1)，加入EDC盐酸盐10mg，室温搅拌2h；移入透析袋中透析48h。5.如权利要求1所述的检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条，所述包被原的制备方法如下：将86mgOVA溶于5ml0.01MPBS，搅拌溶解；氯菊酯半抗原与OVA比例可在1∶1～40∶1的范围内调整，本申请选择在加入40mg氯菊酯半抗原(与OVA摩尔比为40∶1)，加入EDC盐酸盐10mg，室温搅拌2h；移入透析袋中透析48h。6.一种制备权利要求1-5任一项所述试纸条的方法，其包括步骤：1)制备喷涂有氯菊酯单克隆抗体-时间分辨荧光标记物的样品吸收垫；2CN108535474A权利要求书2/2页2)制备具有包被有氯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有抗兔抗体的质控线的反应膜；3)将1)和2)制备好的样品吸收垫、反应膜以及吸水垫组装成试纸条。7.一种检测苹果、玉米、茶叶、西红柿、菠菜、白菜等样品中氯菊酯残留的方法，其包括步骤：1)样本前处理；2)用权利要求1-6任一项所述的试纸条进行检测；3)分析检测结果。3CN108535474A说明书1/8页一种