一种甲硝唑兽药残留酶联免疫分析方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109580935A(43)申请公布日2019.04.05(21)申请号201710904240.8(22)申请日2017.09.29(71)申请人江苏威凌生化科技有限公司地址223100江苏省淮安市盐化新材料产业园区郭桥路18号(72)发明人凌青云(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称一种甲硝唑兽药残留酶联免疫分析方法(57)摘要本发明公开了一种甲硝唑兽药残留酶联免疫分析方法，利用混合酸酐法将由甲硝唑制备出的半抗原MSA与辣根过氧化物酶偶联制备酶标,通过优化包被抗体量、酶标稀释倍数、封闭液、缓冲液pH、发光底物溶液和发光酶标板,建立了直接竞争酶联免疫法与化学发光直接竞争酶联免疫法CLEIA,直接竞争酶联免疫法对甲硝唑的灵敏度(IC50)为0.30±0.04μg/mL,检出限(IC15)为0.036±0.003μg/mL。本发明一种甲硝唑兽药残留酶联免疫分析方法，此法灵敏度高,特异性好,适合多种禽类及水产品中甲硝唑及硝基咪唑类药物多残留的快速检测。CN109580935ACN109580935A权利要求书1/1页1.一种甲硝唑兽药残留酶联免疫分析方法，利用混合酸酐法将由甲硝唑制备出的半抗原MSA与辣根过氧化物酶偶联制备酶标,通过优化包被抗体量、酶标稀释倍数、封闭液、缓冲液pH、发光底物溶液和发光酶标板,建立了直接竞争酶联免疫法与化学发光直接竞争酶联免疫法CLEIA。2.根据权利要求1所述在直接竞争酶联免疫法中对于二甲硝基咪唑、替硝唑、奥硝唑的交叉反应率为194%、76%、115%。2CN109580935A说明书1/2页一种甲硝唑兽药残留酶联免疫分析方法技术领域[0001]本发明属于生物与新医药技术领域，具体涉及兽药检测技术领域。背景技术[0002]动物性食品的安全性不仅关系到国际食品贸易,还关系到人民群众的身体健康。目前各种兽药的大范围应用,虽然给养殖业带来了巨大的经济效益,但长期超剂量违规使用兽药会使食品动物的体内产生多种兽药残留。对动物性食品中的兽药残留进行监控的一个重要手段就是建立快速准确的残留分析方法。发明内容[0003]本发明的目的在于提供一种甲硝唑兽药残留酶联免疫分析方法，该方法操作简便，所用原料价廉，节省人力物力，生产效率高。[0004]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案，通过优化包被抗体量、酶标稀释倍数、封闭液、缓冲液pH、发光底物溶液和发光酶标板,建立了直接竞争酶联免疫法与化学发光直接竞争酶联免疫法CLEIA。[0005]直接竞争酶联免疫法对甲硝唑的灵敏度(IC50)为0.30±0.04μg/mL,检出限(IC15)为0.036±0.003μg/mL。建立的CLEIA方法对甲硝唑灵敏度(IC50)为0.022±0.004μg/mL,检出限(IC15)为0.004±0.0003μg/mL。在直接竞争酶联免疫法中对于二甲硝基咪唑、替硝唑、奥硝唑的交叉反应率为194%、76%、115%,说明本文建立的方法除了可以检测甲硝唑兽药残留外,可以同时检测其他三种硝基咪唑类药物多残留。[0006]与现有技术相比，本发明的有益效果是：该方法灵敏度高,特异性好,适合多种禽类及水产品中甲硝唑及硝基咪唑类药物多残留的快速检测。具体实施方式[0007]对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。[0008]本发明提供一种技术方案：通过优化包被抗体量、酶标稀释倍数、封闭液、缓冲液pH、发光底物溶液和发光酶标板,建立了直接竞争酶联免疫法与化学发光直接竞争酶联免疫法CLEIA。[0009]直接竞争酶联免疫法对甲硝唑的灵敏度(IC50)为0.30±0.04μg/mL,检出限(IC15)为0.036±0.003μg/mL。建立的CLEIA方法对甲硝唑灵敏度(IC50)为0.022±0.004μg/mL,检出限(IC15)为0.004±0.0003μg/mL。在直接竞争酶联免疫法中对于二甲硝基咪唑、替硝唑、奥硝唑的交叉反应率为194%、76%、115%,说明本文建立的方法除了可以检测甲硝唑兽药残留外,可以同时检测其他三种硝基咪唑类药物多残留。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之3CN109580935A说明书2/2页内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。4