基于酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109612819A(43)申请公布日2019.04.12(21)申请号201811438956.4(22)申请日2018.11.28(71)申请人温州医科大学地址浙江省温州市瓯海区东方南路38号温州市国家大学科技园孵化器(72)发明人王学东周佩佩王慧利王飞亚黄宏梅琨(74)专利代理机构温州名创知识产权代理有限公司33258代理人陈加利(51)Int.Cl.G01N1/40(2006.01)G01N27/447(2006.01)G01N21/33(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图7页(54)发明名称基于酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术及其应用(57)摘要本发明公开基于酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术及其应用。经过酶解处理后的样品，杂质含量明显下降，再利用分散剂对萃取剂的分散作用、萃取剂在水中的乳化现象(浊相)以及萃取剂，本身所具有的在室温下溶解和低温条件下固化析出漂浮的特点，从而达到对烟酸克伦特罗和莱克多巴胺的分离和富集，使其检出灵敏度明显升高。该方法可应用于动物饲料和肉类等固体基质中的主要“瘦肉精”种类如CLB和RCT的残留分析前处理，与以往的分散液液萃取技术相比，具有低检出限(分别为CLB为0.19μgkg-1，RCT为0.28μgkg-1)、高灵敏度和高重现性等优点，特别是提取剂的用量仅在微升级，使前处理成本急剧下降、污染大大降低，故有较强的应用价值。CN109612819ACN109612819A权利要求书1/1页1.一种基于酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术，其特征在于包括以下步骤：(1)酶辅助提取，包括以下步骤：(1-1)将待检固体基质样品粉碎，置于容器中，加入水、乙酸缓冲液和酶，然后进行超声振摇和离心，取上清液；本步骤(1-1)所述的水、乙酸缓冲液和酶的体积比为10:1:50-100，且每克待检样品对应50-100ml酶，所述的酶为β-葡萄糖醛酸苷和芳基硫酸酯酶组合物，所述的待检样品为饲料样品或肉类样品；(1-2)将上清液中添加1-5mL,20-80g/LNaCl和20-80μL正磷酸，并调节pH2.0-8.0，得到混合溶液，将混合溶液在30-70℃水浴锅中加热2-10min，然后超声振摇1-5min；(1-3)混合溶液在3000-6000rpm离心1-5min，将沉淀蛋白和溶解性碳水化合物，取本步骤(1-3)的上清液，并将pH调至5.0-12.0；(2)以20-60μL熔点13-15℃的1-十一烷醇、熔点22-24℃的1-十二烷醇、熔点17-18℃的2-十二烷醇、熔点17-18℃的溴代十六烷和熔点14-16℃的1,10-二氯癸烷中的一种或多种组合做萃取剂，对步骤(1-3)的上清液进行萃取，添加四种常规盐(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl、Mg2SO4中的一种或多种组合，添加量为0.1-6.0g，置于15-65℃下萃取，样品pH9-12，氮吹时间为0.5-5.0min，用缓冲液溶解后进毛细管电泳仪检测。2.根据权利要求1基于酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术，其特征在于：所述待检固体基质样品为动物饲料；a)根据权利要求1基于酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术，其特征在于：所述待检固体基质样品为肉类样品。3.一种基于权利要求1或2所述酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术萃取动物饲料中的烟酸克伦特罗或/和莱克多巴胺应用。4.一种基于权利要求1或2所述酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术萃取肉类中的烟酸克伦特罗或/和莱克多巴胺的应用。2CN109612819A说明书1/4页基于酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用的前处理技术及其应用技术领域[0001]本发明属于药物检测领域，具体是指应用于饲料和肉类产品中“瘦肉精”检测领域，特别是指酶解辅助和固化漂浮液滴微萃取联用(EA-SFODM)的前处理技术与毛细管电泳(紫外检测器)CEC-UVD结合检测瘦肉精的方法。背景技术[0002]近年来，食品安全形势不容乐观，食品污染依然是危害公众健康的重要因素。“瘦肉精”是一类能够促进瘦肉生长，抑制脂肪生成、加速脂肪转化的药物，主要包括烟酸克伦特罗(clenbuterol，CLB)、甲基烟酸克伦特罗(methylclenbuterol)、莱克多巴胺(rectopamine，RCT)、沙丁胺醇(salbutamol)、马布特罗(mabuterol)、特布它林(terbutaline)和妥布特罗(tulobuterol)等。在中国，“瘦肉精”种类中应用最多的为CLB和RCT，该药物的半衰期长，在体内代谢慢，极易蓄积残留于动物体内，在肝脏中的平均浓度高达45mg/kg，人食用后易出现