增强羊栖菜多糖生物活性的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109628524A(43)申请公布日2019.04.16(21)申请号201910026070.7(22)申请日2019.01.11(71)申请人浙江工商大学地址310018浙江省杭州市下沙高教园区学正街18号(72)发明人周涛杨斯淇(74)专利代理机构杭州中成专利事务所有限公司33212代理人金祺(51)Int.Cl.C12P19/14(2006.01)C12P19/04(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图5页(54)发明名称增强羊栖菜多糖生物活性的方法(57)摘要本发明公开了一种增强羊栖菜多糖生物活性的方法，包括以下步骤：羊栖菜粗多糖于pH为4.5～7.0的缓冲溶液中、在由果胶酶和糖化酶组成的复合酶的作用下进行降解反应；所得的反应液除酶后过滤，所得滤液浓缩后用截留分子量为3500Da的透析袋透析，将所得的透析液浓缩，冷冻干燥，得到羊栖菜复合酶解多糖ESFP。采用本发明的方法不但能显著提高羊栖菜多糖的抗氧化活性与胆酸结合能力，还能增强其对巨噬细胞的免疫调节活性。CN109628524ACN109628524A权利要求书1/1页1.增强羊栖菜多糖生物活性的方法，其特征是包括以下步骤：1)、降解：先将羊栖菜粗多糖溶于pH为4.5～7.0的缓冲溶液，接着加入由果胶酶和糖化酶组成的复合酶，再加入缓冲溶液进行稀释，所得的体系中羊栖菜粗多糖的浓度为2～5mg/mL、复合酶总浓度为20～80U/mL；所述果胶酶：糖化酶的活力比＝6:0～0:6；将所述体系于40～65℃的温度下振荡反应1～5h，从而实现对羊栖菜粗多糖的降解；2)、将步骤1)所得的反应液除酶后过滤，所得滤液浓缩至原体积的20～30％；用截留分子量为3500Da的透析袋透析24～48h，将所得的透析液浓缩，冷冻干燥，得到羊栖菜复合酶解多糖ESFP。2.根据权利要求1所述的增强羊栖菜多糖生物活性的方法，其特征是：所得的体系中羊栖菜粗多糖的浓度为4.0mg/mL、复合酶总浓度为68.4U/mL；所述果胶酶：糖化酶的活力比＝3.3:1，缓冲溶液的pH为6.0；于54.2℃的温度下振荡反应3h；得到羊栖菜复合酶解多糖ESFP1-1。3.根据权利要求1或2所述的增强羊栖菜多糖生物活性的方法，其特征是：所述pH为4.5～7.0的缓冲溶液是pH为4.5～7.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液、柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液。4.根据权利要求1～3任一所述的增强羊栖菜多糖生物活性的方法，其特征是：将羊栖菜复合酶解多糖ESFP1-1进行分离纯化；包括以下步骤：①、粗分：选用CelluloseDEAE-52层析柱；称取400±40mg羊栖菜复合酶解多糖ESFP1-1，溶于7mL的去离子水中离心取上清液，将上清液均匀的加入到层析柱填料上表面，依次用去离子水、以及浓度分别为0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L、0.8mol/L的NaCl溶液洗脱，流速为1mL/min，分别收集0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L、0.8mol/L的NaCl溶液这4种洗脱剂各自对应的洗脱液，减压浓缩、透析脱盐、冷冻干燥，从而对应得到羊栖菜复合酶解多糖的DEAE-52的四种初步纯化的多糖组分；②、细分：选用SephadexG-100凝胶色谱柱；将以上经过CelluloseDEAE-52粗分的四种初步纯化的多糖组分分别进行以下操作：称取100±10mg初步纯化的多糖组分溶于3mL去离子水中，离心取上清液，加样于SephadexG-100凝胶色谱柱中，用去离子水洗脱，流速为0.20mL/min，合并多糖洗脱液，减压浓缩、冷冻干燥得到羊栖菜复合酶解多糖的四个纯化组分，分别命名为ESFP1、ESFP2、ESFP3和ESFP4。5.如权利要求1～4任一所得到的降解羊栖菜多糖、纯化多糖在制备功能性食品基料中的应用。2CN109628524A说明书1/8页增强羊栖菜多糖生物活性的方法技术领域[0001]本发明属于化学化工技术领域，涉及一种通过对羊栖菜多糖进行酶解从而增强其生物活性的方法。背景技术[0002]羊栖菜中含有各种具有健康益处的生物活性成分，尤其是其中的酸性多糖，具有抗病毒，抗真菌，抗菌，抗氧化，抗炎，降血脂和抗肿瘤特性。由于羊栖菜价格低廉，分布广泛，因此将羊栖菜加工为功能性食品或开发成低副作用的药物具有良好的研究前景。羊栖菜中碳水化合物的含量较高，但其中的粗多糖的生物活性相对偏低。多糖的生物活性与其分子结构密切相关，包括糖苷键、单糖组成、硫酸基含量和分子量等。高分子量多糖会由于水溶性较低，从而阻碍它们渗透到细胞中以执行给定的功能，而较低分子量的硫酸多糖则显示出更高的生物活性。由于活性多糖经不同方法降解得到的多糖的功能特性也不