一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109917126A(43)申请公布日2019.06.21(21)申请号201910146931.5C07D401/06(2006.01)(22)申请日2019.02.27(71)申请人成都市房屋安全事务中心((成都市白蚁防治研究中心))地址610000四川省成都市青羊区人民中路一段28号(72)发明人张亮徐鹏熊先贵贾慧娴彭凯俊王思忠陈尚海曾小虎李宁吴小胜崔海峰赵正苗(74)专利代理机构成都中汇天健专利代理有限公司51257代理人周成宝(51)Int.Cl.G01N33/536(2006.01)G01N33/553(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法(57)摘要本发明公开了一种检测吡虫啉的试纸条，包括底板，底板的上设有样品吸收垫和吸水垫；底板上还设有结合物释放垫，结合物释放垫的一部分位于样品吸收垫与底板之间；被样品吸收垫覆盖，另一部分不被样品吸收垫覆盖且位于样品吸收垫与吸水垫之间；在结合物释放垫与吸水垫之间设有反应膜，反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上设有吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。CN109917126ACN109917126A权利要求书1/2页1.一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，包括底板，底板的上设有样品吸收垫和吸水垫；底板上还设有结合物释放垫，结合物释放垫的一部分位于样品吸收垫与底板之间；被样品吸收垫覆盖，另一部分不被样品吸收垫覆盖且位于样品吸收垫与吸水垫之间；在结合物释放垫与吸水垫之间设有反应膜，反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上设有吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。2.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，所述吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物是由吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白中任意一种。3.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，所述吡虫啉单克隆抗体是以吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由吡虫啉单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得。4.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，检测线的制备包括以下过程：步骤1，将吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联，得到吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物；步骤2，将吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线。5.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，质控线的制备包括以下过程：步骤1，提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；步骤2：将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线。6.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，制备上述吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物包括以下过程：步骤1，制备吡虫啉单克隆抗体：用吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到吡虫啉单克隆杂交瘤细胞株；步骤2，用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；步骤3，将吡虫啉单克隆抗体加入胶体金中，得到吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。7.根据权利要求5所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，上述样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h，牛血清白蛋白按体积分数计算。8.一种吡虫啉半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取6-氯-3-（氯甲基）吡啶-2-胺0.5g，加二甲基亚砜80ml溶解，加氢化钠0.27g，搅拌，加2-硝基亚氨基咪唑烷0.41g，油浴加热，90℃搅拌反应8h；停止反应，冷却至室温，加蒸馏水100ml，加乙酸乙酯80ml×3，萃取三次。合并有机相，蒸干，上硅胶柱，二氯甲烷/甲醇（v/v，10/1）洗脱分离，得到氨基吡虫啉半抗原产物。9.根据权利要求8所述的一种吡虫啉半抗原的制备方法，其特征在于，吡虫啉半抗原的分子结构式为：2CN109917126A权利要求书2/2页10.一种检测吡虫啉残留的方法，其特征在于，包括以下步骤:S1:样本处理；S2:利用权利要求1~7任一项所述的检测吡虫啉的试纸条进行检测。3CN109917126A说明书1/7页一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法技术领域[0001]本发明涉及吡虫啉检测，具体涉及一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法。背景技术[0002]吡虫啉(IMI)是烟碱类超高效杀虫剂，具有广谱、高效、低毒、低残留，害虫不易产生抗性，对人、畜、植物和天敌安全等