用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110031586A(43)申请公布日2019.07.19(21)申请号201910379475.9(22)申请日2019.05.08(71)申请人南京中医药大学地址210023江苏省南京市栖霞区仙林大学城仙林大道138号(72)发明人韩疏影宋易霖胡家淳张丽池玉梅贲宇(74)专利代理机构南京睿之博知识产权代理有限公司32296代理人周中民(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)权利要求书2页说明书7页(54)发明名称用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法(57)摘要本发明涉及高效液相色谱流动相分析技术领域，本发明提供的用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法，包括以下步骤：初步选取实验条件，选取合适的洗脱剂和试验温度；获取各组份的保留值方程和计算色谱峰宽；预测组份保留时间，利用保留值方程，对各组份在任意流动相比例下的移动速度进行积分，得到线性多阶梯度条件下，样品各组份在色谱柱中移动的总距离公式，结合色谱柱长计算各组份保留时间；优化流动相比例梯度，给定分离度最小值、分离度最大值、最大实验时间要求，计算分离度小于最小值的不进行优化。本发明的优点在于使色谱图上各物质色谱峰充分分离，同时又不过度分离。CN110031586ACN110031586A权利要求书1/2页1.用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.初步选取实验条件：选取样品中各组份的标样，分别以不同洗脱剂为流动相，并在不同温度条件下，测定和计算各物质色谱峰的分离度，选取最小分离度最大的洗脱剂和试验温度作为后续实验；S2.获取各组份的保留值方程和计算色谱峰宽公式：在选取的试验温度和洗脱剂前提下，为样品中各组份建立描述流动相比例和容量因子关系的保留值方程和色谱峰宽计算公式；S3.预测组份保留时间，利用保留值方程，对各组份在任意流动相比例下的移动速度进行积分，得到线性多阶梯度条件下，样品各组份在色谱柱中移动的总距离公式，结合色谱柱长计算各组份保留时间；S4.优化流动相比例梯度：给定分离度最小值、分离度最大值、最大实验时间要求，根据步骤S3，在设定的流动相比例条件下，计算各组份的保留时间，选择最佳的比例，使得样品中所有组份色谱峰基线分离度满足要求。2.根据权利要求1所述的用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法，其特征在于，所述步骤S2中，保留值方程是：lnK＝a+blnf+cf，其中，a、b、c为待测色谱特性常数；K为容量因子；f为二元流动相中洗脱剂的体积分数，即流动相比例；各组份的容量因子K通过公式tR＝t0(1+K)计算而得，其中，tR为保留时间、t0为色谱柱死时间；测得色谱柱死时间，并测得该组份在不同流动相比例下的保留时间，计算对应的K值，并与流动相比例拟合出保留值方程的常数；色谱峰宽与保留时间、死时间之关系为：其中，neff为有效理论塔板数，W为色谱峰宽。3.根据权利要求1所述的用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法，其特征在于，所述步骤S3中，多阶线性梯度洗脱条件下，任意时刻流动相比例为：其中，ti、ti+1分别为第i、i+1阶梯度的起始时间，fi、fi+1分别为第i、i+1阶梯度的起始体积分数；组份在任意流动相比例下的移动速度为L/(t0+t0*Ki)，通过速度对时间积分，获得组份移动总距离的通式为：其中，Δti为组份在第i阶流动相影响下移动的距离除以流动相的流速，即第i阶流动相完全流经在其影响下待测物移动距离所用的时间，L为色谱柱长；根据色谱柱长确定阶数i，使得组份在累计到第i阶、第i+1阶流动相比例影响下的移动总距离Li、Li+1，满足当Li<L<Li+1，使用变上限积分构建色谱柱长与各组份移动总距离的关系方程,归一化后为：2CN110031586A权利要求书2/2页方程中，x即为组份的保留时间。4.根据权利要求1所述的用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法，其特征在于，所述步骤S4中，包括如下步骤，a)设定流动相梯度初始阶数为0，上一阶结束时刻为0，初始待优化组份为全部组份；b)阶数加1，待计算确定最后一阶的流动相梯度值和结束时间；设定最后一阶流动相比例变化范围为1％～100％、变化步长为1％、计算初始值为1％；c)将当前待计算流动相比例，与之前已确定的各阶梯度及对应结束时间组合生成梯度序列和时间序列后，按前述方法，计算保留时间、峰宽、分离度，并记录：c1)根据步骤S3计算该比例条件下，全部组份的保留时间；c2)根据步骤S2峰宽W和保留时间tR关系的多项式系数及保留时间，计算全部组份的峰宽值；c3)按照计算各相邻色谱峰间分离度，其中，R为分离度，tR1和tR2分别为相邻两色谱峰的保留时间；c4)记录当前比例、全部组份保留时间、全部组份分离度