一种驯鹿角的真伪鉴别方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110530999A(43)申请公布日2019.12.03(21)申请号201910879610.6(22)申请日2019.09.18(71)申请人山东省食品药品检验研究院地址250101山东省济南市高新技术开发区新泺大街2749号(72)发明人王玉团邢晟杭宝建陈晓由鹏飞石峰(74)专利代理机构北京索睿邦知识产权代理有限公司11679代理人刘丽(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/72(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称一种驯鹿角的真伪鉴别方法(57)摘要本发明涉及中药鉴别技术领域,特别涉及一种驯鹿角的真伪鉴别方法：将待检样品使用胰蛋白酶酶解后，使用超高效液相色谱仪和高分辨质谱仪进行检测。采用精准离子和相对保留时间两种方式相结合的方法来判断质谱峰的有无，进而来判断驯鹿角的真伪，提高了检测方法的准确度，优于采用单一方式的方法。CN110530999ACN110530999A权利要求书1/1页1.一种驯鹿角的真伪鉴别方法,其特征在于将待检样品使用蛋白酶酶解后，使用超高效液相色谱仪和高分辨质谱仪进行检测，超高效液相色谱条件：ThermoHypersilGOLD色谱柱（100×2.1mm，3μm），柱温40℃，流动相A为0.1%甲酸，流动相B为含有0.1%甲酸的乙腈，梯度洗脱：0-2min，流动相A95%，流动相B5%；2-75min，流动相A95%→55%，流动相B5%→45%；75-80min，流动相A55%→0%，流动相B45%→100%；80-85.9min，流动相A0%，流动相B100%；85.9-86min，流动相A0%→95%，流动相B100%→5%；86-90min，流动相A95%，流动相B5%；进样量为5μL，流速0.3mL·min-1；高分辨质谱选择m/z（双电荷，正离子）575.822±0.005作为检测离子。2.根据权利要求1所述的真伪鉴别方法,其特征在于采用ThermoFusion-Orbitrap高分辨质谱仪，ESI离子源，正离子模式，喷雾电压为2.1kV，离子传输毛细管温度为320℃，S-Lens传输效率设置为60%；一级质谱采用Orbitrap作为质量分析器，分辨率为120000（m/z400），采集范围为350～1550Th；二级质谱采用离子阱作为质量分析器，采用RapidScan模式进行扫描，采用HCD碎裂模式，碎裂能量NCE设置为40%。3.根据权利要求1所述的真伪鉴别方法,其特征在于若检测离子575.822±0.005检测后出现质谱峰,其保留时间为6.20×（2.16±0.1）min,则待检样品中含有驯鹿角；若检测离子575.822±0.005检测后未出现质谱峰，则待检样品中不含有驯鹿角；若检测离子575.822±0.005检测后出现质谱峰,其保留时间不在6.20×（2.16±0.1）min范围内,则待检样品中不含有驯鹿角。4.根据权利要求3所述的真伪鉴别方法,其特征在于以高分辨质谱m/z（双电荷，正离子）451.731±0.005作为参照检测离子，对应的质谱峰为参照峰，检测离子575.822±0.005相对于参照检测离子451.731±0.005的相对保留时间为2.16±0.1。5.根据权利要求3所述的真伪鉴别方法,其特征在于最小检出限为0.17mg·mL-1。6.根据权利要求1所述的真伪鉴别方法,其特征在于所述蛋白酶为胰蛋白酶。7.根据权利要求1所述的真伪鉴别方法,其特征在于将待检样品加入变性缓冲液，然后加入DTT溶液，置于90℃保温处理4h，取出，放冷至室温，加入IAA溶液，摇匀，避光反应60min，离心，上清液离心，截留物中加入碳酸氢铵溶液和胰蛋白酶，酶解，过滤，使用超高效液相色谱仪和高分辨质谱仪进行检测。8.根据权利要求7所述的真伪鉴别方法,其特征在于变性缓冲液中含6mol·L-1盐酸胍、1.3mol·L-1Tris和2.4mmol·L-1EDTA。9.根据权利要求7或8所述的真伪鉴别方法,其特征在于精密称取待检样品粉末20mg，加1ml变性缓冲液，加50μL的0.5mol·L-1DTT溶液，置于90℃保温处理4h，取出，放冷至室温，加入120μl的0.55mol·L-1IAA溶液，摇匀，避光反应60min，离心，取上清液200μL置于10k超滤管中，离心，截留物加200μL的1%碳酸氢铵溶液和5μL胰蛋白酶溶液，涡旋2min，置于37℃恒温培养箱中酶解30min，0.22μm滤膜过滤，即得。10.根据权利要求9所述的真伪鉴别方法,其特征在于胰蛋白酶溶液浓度为10mg·mL-1。2CN110530999A说明书1/7页一种驯鹿角的真伪鉴别方法技术