一种马齿苋多肽提取物及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110592167A(43)申请公布日2019.12.20(21)申请号201910794274.5(22)申请日2019.08.27(71)申请人杨凌萃健生物工程技术有限公司地址712100陕西省咸阳市杨凌示范区新桥南路5号(72)发明人周凯蔡冬青季亚飞(74)专利代理机构余姚德盛专利代理事务所(普通合伙)33239代理人吴晓微(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K2/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种马齿苋多肽提取物及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种马齿苋多肽提取物及其制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)取干燥后的马齿苋药材，粉碎成粗粉，加入石油醚回流提取，过滤，溶剂挥干；(2)加入水，加入中性蛋白酶，温浸提取，用碱溶液调节pH至9～10，再向其中添加碱性蛋白酶，温浸提取，煮沸灭酶，滤布过滤，减压浓缩，离心保留上清液；(3)将上清液过D101大孔树脂，收集下柱液，用水洗柱，收集水洗液，合并下柱液与水洗液，减压浓缩；(4)加入乙醇，静置后抽滤，减压补水浓缩至无醇；(5)使用截留分子量为2kDa的透析袋，室温下透析，减压浓缩后真空干燥粉碎即得马齿苋多肽提取物。本发明制备的马齿苋多肽提取物蛋白提取率≥53.5％，蛋白含量≥73.8％，且多肽分子量≤2kDa的占比≥92.7％。CN110592167ACN110592167A权利要求书1/1页1.一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)脱脂：取干燥后的马齿苋药材，粉碎成粗粉，加入药材8～10倍量的石油醚回流提取2～3h，所述石油醚的沸程为60～90℃，过滤，将滤渣中的溶剂挥干，得石油醚脱脂后的药材；(2)提取浓缩：向石油醚脱脂后的药材中加入水，加入药材量0.3～0.5％的中性蛋白酶，温浸提取；温浸结束后，用碱溶液将提取溶液调节pH至9～10，再向其中添加药材量的0.3～0.5％的碱性蛋白酶，温浸提取；温浸结束后，煮沸灭酶，滤布过滤，减压浓缩，并使用酸溶液将浓缩液pH调节至中性，离心保留上清液；(3)D101纯化：将上清液过D101大孔树脂，所述D101大孔树脂的用量为药材量的1/10～1/8，收集下柱液，用水洗柱，收集水洗液，合并下柱液与水洗液，减压浓缩，得第一浓缩液；(4)醇沉：向第一浓缩液中缓慢加入4～6倍量的90％～100％乙醇，边加边搅拌，2～6℃下静置2～5h后抽滤，抽滤液减压补水浓缩至无醇，得第二浓缩液；(5)透析：在第二浓缩液中使用截留分子量为2kDa的透析袋，室温下透析5～10h，透析液减压浓缩后真空干燥粉碎即得马齿苋多肽提取物。2.如权利要求1所述的一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述水的加入量为药材10～12倍量。3.如权利要求1所述的一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述中性蛋白酶为木瓜蛋白酶。4.如权利要求1所述的一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述温浸提取的温度为45～60℃，时间为1.5～2h。5.如权利要求1所述的一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述煮沸灭酶的时间为10～30min。6.如权利要求1所述的一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述减压浓缩时的真空度-0.07～-0.09Mpa，温度60～80℃，浓缩液体积为药材量的1/3～1/2。7.如权利要求1所述的一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述水的用量为1～1.5BV树脂体积。8.如权利要求1所述的一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述减压浓缩至药材量的1/15～1/10。9.如权利要求1所述的一种马齿苋多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述浓缩的体积为药材量的1/15～1/10。10.一种马齿苋多肽提取物，其特征在于，采用如权利要求1～9任意一种马齿苋多肽提取物的制备方法制备得到。2CN110592167A说明书1/6页一种马齿苋多肽提取物及其制备方法技术领域[0001]本发明属于植物提取领域，具体涉及一种马齿苋多肽提取物及其制备方法。背景技术[0002]马齿苋又名长寿菜，为马齿苋科植物全草，多以其干燥地上部分入药，生于山区潮湿肥沃的地方，遍布全国。味酸，性寒。归肝、大肠经，具有清热解毒、凉血止血、止痢之功效，用于热毒血痢、痈肿疗疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血和崩漏下血。近年的药理研究表明，马齿苋具有