水稻稻曲病菌生长与侵染因子.docx

水稻稻曲病菌生长与侵染因子稻曲病(falsesmutofrice)是水稻后期发生的一种重要的真菌性病害主要危害水稻穗部。近年来随着粳稻、两系杂交稻的大面积推广该病发生日趋严重给我国粮食生产带来巨大损失[1]。尤其是稻曲病菌可产生对动植物有害的毒素因此稻曲病的防治对粮食安全保障至关重要。稻曲病菌菌丝及孢子在病害循环侵染过程中起着重要作用而菌丝生长和孢子萌发与温度、pH、营养物质等因子有着密切关系；另外气象因子及寄主生育期对病菌孢子的释放、侵染等也有影响[1]。本试验主要从温度、pH、碳氮源及无机盐等生态因素对稻曲病菌菌丝生长和孢子萌发的影响进行研究旨在进一步明确稻曲病菌的生物学特性及流行规律为深入了解和防控稻曲病提供参考。1材料与方法1.1供试菌株稻曲病菌株XC(宣城)、QJ(全椒)、QS(潜山)、FD(肥东)、LJ(庐江)由安徽农业大学植物病理教验室提供。1.2温度对菌丝生长及孢子萌发的影响1.2.1温度对菌丝生长的影响将各菌株菌碟接入PDA培养基分别置5、10、15、20、25、28、30和35℃培养每处理3次重复。培养3、7、11、14和21d后用十字交叉法测量菌落直径计算菌丝生长速率[2]。1.2.2温度对孢子萌发率的影响稻曲病菌在PS培养液中震荡培养14d滤去菌丝后制成孢子悬浮液备用。吸取0.5mL孢子液均匀涂布于PSA平板然后将平板置不同温度下黑暗培养12h后镜检萌发率每平板镜检20个视野以芽管长度超过孢子直径确定孢子萌发[3]。温度设置同1.2.1。1.3pH值对菌丝生长及孢子萌发的影响用1mol•L-1的HCl和NaOH分别将灭菌PDA培养基和孢子悬浮液的pH值调为3、4、5、6、7、8、9和10共8个处理每处理3次重复。接菌后28℃培养测定菌落直径和孢子萌发率方法同1.2。1.4不同碳、氮源及浓度对菌丝生长的影响以PA为基础培养基加入蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和淀粉等配成不同碳源培养基各碳源添加量为每1000mL培养基20g。在含上述培养基平板上接入菌碟28℃培养14d后测菌落直径筛选出最佳碳源并设0、0.5%、1%、2%、3%和4%等6个浓度分析碳源浓度对菌丝生长的影响。每处理3次重复。以硝酸氨、硝酸钙、氯化氨、L-天冬门酰胺、醋酸氨等为氮源与PA基础培养基配成不同氮源培养基各氮源在1000mL培养基中的添加量根据各氮源中氮的含量折合浓度为0.1mol•L-1接菌、培养方法均同上。上述均以PA作为对照。1.5无机盐对菌丝生长、产孢量及菌丝鲜重的影响以PDA培养基为基础培养基共设置9个处理：（1）硝酸钙0.5g（A）；(2)硫酸镁0.5g(B)；(3)硫酸亚铁0.1g(C)；(4)磷酸氢二钾1.0g(X)+A；(5)X+B；(6)X+C；(7)磷酸氢二钠1.0g(Y)+A；(8)Y+B；(9)Y+C。接入菌碟培养14d后测菌落直径、产孢量及菌丝鲜重。每处理3次重复。1.6病菌孢子致死温度测定将毛细管插入105mL-1的孢子悬浮液中迅速在酒精灯上封口分别移入温度为50、55、56、58和60℃的水浴锅中静置5min后涂于胁本哲氏培养基平板上28℃黑暗培养14d后观察菌落数以无菌落的最低温度为该病菌孢子的致死温度。1.7气象因子对稻曲病菌孢子释放的影响于2007年8月下旬水稻处于剑叶期时在分生孢子释放高峰期利用捕孢器(河南佳多)于晴天和阴雨天分别连续48h不间断捕捉孢子晴天最高气温为32℃阴天最高为27℃。每2h换1次玻片镜检、记录该时段捕捉的分生孢子数。每玻片观察100视野(注：试验田稻曲病发病率达17%)。1.8寄主生育期对稻曲病菌侵入的影响通过调整播期(12段播期每段间隔3d)使接种时水稻生育期分别处于剑叶露尖、剑叶完全展开、孕穗期(剑叶展开后5～6d)、破口期、齐穗扬花期和灌浆初期。采用喷雾法接种接种浓度为100倍显微镜每视野下100～150个小孢子[4]。接种后用硫酸纸套袋。每处理接25丛设空白对照。水稻乳熟后期调查接种稻丛的病穗率和病粒率。供试水稻品种为中熟粳糯稻“皖稻68”。2结果与分析2.1温度对菌丝生长及孢子萌发的影响从图1可看出稻曲病菌菌丝生长的最低温度为5℃10℃以上菌丝能正常生长且随温度升高生长速率加快28℃达到最大值30℃以上菌丝生长受抑制。各菌株孢子萌发的最佳温度为28℃30℃后孢子萌发率开始降低56℃孢子萌发接近于0。2.2pH值对菌丝生长及孢子萌发的影响从图2可见pH值在3～10之间稻曲病菌菌丝均可生长最适pH