梨幼果多酚提取工艺优化.docx

梨幼果多酚提取工艺优化作者：赵梅张绍铃齐开杰衡跃进陶书田单位：南京农业大学梨工程技术研究中心宝应县奕佳农牧有限公司实验方法挑选健康的幼果去皮去核果肉切成小块液氮研磨成粉末称取一定质量的粉末按一定的提取条件在恒温摇床中匀速浸提将粗提液离心过滤后测定并计算多酚得率。梨幼果多酚含量的测定采用福林酚法（Folin-Ciocalteu）[6]测定以没食子酸为基准物质计算梨幼果多酚含量。回归方程为y=8.5095x+0.0111R2=0.9984。梨幼果多酚得率的计算多酚得率/(mg/g)=CxVxN/m式中：C为提取液中多酚质量浓度/(mg/mL)；V为提取液体积（mL）；N为稀释倍数；m为梨幼果果肉质量（g）。梨幼果多酚提取的单因素试验选取乙醇浓度、提取时间、提取温度、提取料液比为影响因素进行单因素试验。乙醇浓度对梨幼果多酚得率的影响采用不同的乙醇浓度10%、30%、50%、70%、90%固定提取时间5h提取温度60℃提取料液比1:20（g/mL）研究不同乙醇浓度对梨幼果多酚得率的影响。提取时间对梨幼果多酚得率的影响采用不同的提取时间2、4、6、8、10、12h固定乙醇浓度50%提取温度60℃提取料液比1:15(g/mL)研究不同提取时间对梨幼果多酚得率的影响。提取温度对梨幼果多酚得率的影响采用不同提取温度20、40、60、80、100℃固定乙醇浓度50%提取时间1.5h料液比1:20（g/mL）研究不同提取温度对梨幼果多酚得率的影响。料液比对梨幼果多酚得率的影响采用不同提取料液比1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30固定乙醇浓度50%提取时间5h提取温度60℃研究不同提取温度对梨幼果多酚得率的影响。梨幼果多酚提取的正交试验在单因素试验的基础上进一步考察乙醇浓度、提取时间、提取温度、提取料液比对梨幼果多酚得率的影响设计4因素3水平L9（34）的正交试验。梨幼果酚类物质HPLC分析提取物经过0.45μm微滤膜过滤后利用色谱仪进行测定。高效液相色谱分析条件[4]：色谱柱C18柱150mmx4.6mmΦ5μm；流动相甲醇和水；柱温30℃；流速0.6mL•min-1；进样量5μL；紫外检测器波长280nm。流动相A：水用磷酸调pH3.2；B：甲醇。线性梯度淋洗程序时间（min）/B（%）：0/23/24/2511/5016/8026/8030/235/2。数据统计分析利用Excel和SPSS17.0统计软件对获得的数据进行统计分析。结果与分析1提取条件的单因素试验1.1乙醇浓度对梨幼果多酚得率的影响由图1可以看出乙醇浓度低于70%时随着乙醇浓度增加梨幼果多酚得率也逐渐提高；乙醇浓度高于70%时多酚得率随着乙醇浓度的增加而下降。乙醇浓度过低多酚得率低可能是因为多酚类物质在植物体内通常与蛋白质、多糖等以氢键和疏水键形成稳定的分子复合物而水断裂氢键的作用较弱提取液中水的比例过高时不足以破坏样品中多酚类物质与蛋白、多糖或其他物质的连接多酚得率低[7]；乙醇浓度过高多酚得率低可能是因为溶出较多醇溶性杂质、色素、亲脂性较强的成分这些成分与多酚类化合物竞争同一乙醇水分子[8]。乙醇浓度为50%和70%时多酚得率之间没用显著性差异考虑到工业成本确定最佳乙醇浓度为50%。1.2提取时间对梨幼果多酚得率的影响如图2所示当提取时间达到4h多酚得率最高继续延长提取时间多酚得率开始下降。这是因为随着时间加长可以使多酚充分溶解于溶剂中但时间过长会因为温度的影响发生降解、缩合、氧化等化学反应[9]。此外时间越长耗能越大[10]故选择最佳提取时间为4h。1.3提取温度对梨幼果多酚得率的影响由图3可知在所设计的温度范围内多酚得率随温度的升高而呈增大趋势。在20～40℃之间多酚得率上升速率最慢40～60℃之间多酚得率的升高最明显60～100℃之间多酚得率的增量有所下降。可能是由于随着温度的升高一方面有利于未游离出来的多酚的浸出[11-12]另一方面也促进已经提取出来的多酚的氧化与降解[13]。故综合考虑选择最佳提取温度为60℃。1.5料液比对梨幼果多酚得率的影响由图4可以看出随着料液比的增大多酚得率逐渐增加当料液比到达1:25以后料液比继续增大多酚得率增加缓慢。这可能是由于料液比为1:25时溶剂已经能将梨幼果中多酚提取出来继续增加料液比并不能显著提高多酚得率。而且料液比过高不利于回收且造成浪费。因此从提取效果、经济角度方面考虑料液比选择1:25较为合适。2正交试验优化梨幼果多酚提取条件通过各因素的极差R（表2）比较发现RB>RA>RD>RC极差R越大其对应因素对梨幼