杜仲叶化学成分的研究.docx

杜仲叶化学成分的研究[摘要]杜仲叶来源于杜仲科植物杜仲Eucommiaulmoides的干燥叶。为了深入了解杜仲叶中的活性成分该研究采用D-101大孔树脂MCI树脂反相ODSSephadexLH-20Rp-HPLC制备柱色谱法和重结晶等方法从杜仲叶乙醇提取物的正丁醇萃取部位中分离得到10个化合物通过MS和NMR等谱学方法鉴定结构为山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷（1）槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（2）槲皮素（3）槲皮素-3-O-β-D-木糖基-（12）-β-D-葡萄糖苷（4）山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖基-（16）-β-D-葡萄糖苷（5）（2S3S）-（-）-花旗松素-3-O-β-D-葡萄糖苷（6）4-羟基肉桂酸（7）（+）-环橄榄脂素（8）松脂素-β-D-葡萄糖苷（9）角鲨烯（10）其中化合物15～710为首次从该属植物中分离得到。采用DPPH自由基清除法对分离得到的化合物进行抗氧化活性研究。结果显示其中化合物2表现出显著的自由基清除能力（IC50为13.7μmol·L-1）活性强于VitC（IC50为59.9μmol·L-1）；化合物139显示中等强度自由基清除能力（IC50分别为161137214μmol·L-1）活性弱于VitC但强于26-二羟丁基对甲酚（IC50为236μmol·L-1）；化合物46自由基清除能力较弱（IC50分别为264299μmol·L-1）；提示杜仲的药理作用可能与其黄酮和木脂素类化学成分具有能够体内清除体内活性氧及抗氧化成分有关。[关键词]杜仲叶；化学成分；黄酮；木脂素；DPPH自由基清除法抗氧化活性[收稿日期]2013-11-27[基金项目]国家自然科学基金项目（81071037）；陕西省教育厅科技计划项目（09jk394）[通信作者]宋小妹Tel：[phone]E-mail：；梅其炳Tel：[phone]E-mail：中药杜仲为杜仲科植物杜仲EucommiaulmoidesOliver.的干燥树皮味甘、性温归肝、肾经具有补肝肾、强筋骨等功效主要用于肝肾不足、腰膝酸痛、筋骨无力、头晕目眩等[1]。本课题组前期研究中发现在去卵巢（OVX）大鼠骨质疏松模型上杜仲提取物表现出较好的预防绝经后骨质疏松症的作用与雌激素相比具有无子宫刺激的优点[2]然而其抗骨质疏松作用的物质基础并不明确。文献研究表明体内活性氧及抗氧化成分羟自由基SOD、MDA及GSH-Px等可能参与绝经后骨质疏松的病理过程[3-4]由于杜仲富含黄酮、木脂素等多酚类化合物[5]本研究推测杜仲抗骨质疏松作用可能是通过其能够影响活性氧及抗氧化成分有关。因此拟开展了杜仲化学成分的研究并进行抗氧化活性测试为揭示杜仲抗骨质疏松的药理作用奠定基础。另外由于杜仲的采集为15年以上植物的树皮杜仲叶与杜仲皮具有相似化学成分和药理作用[6]为了珍惜、保护及充分利用资源本实验采用活性追踪的方式对杜仲叶化学成分进行了深入研究。通过采用D-101大孔树脂、MCI树脂、反相ODSSephadexLH-20、Rp-HPLC制备柱色谱法和重结晶等方法从中分离出10个化合物并将分到的化合物通过11-二苯基-2-苄基苯肼自由基清除法（DPPH法）来评价其抗氧化活性。1材料Bruker-AVANCE500核磁共振仪；WatersQuattroPremier型和AgilentTechnologies6550Q-TOF质谱仪以及AgilentTechnologies6520Accurate-Mass-Q-TOFLC-MS液质联用仪；CombiflashRf200快速制备色谱仪（Isco公司）；Waters2695高效液相色谱仪ShimadzuLC-6AD型高效半制备液相色谱仪（UltimateXB-C18或AllsphereODS-2制备柱）；Molgene1810a型纯水仪；RV10DdigitalFLEX型旋转蒸发仪（IKA公司）；DLSB-5/20型低温冷凝循环泵（郑州科工贸公司）；D-101大孔树脂（西安蓝晓科技新材料股份有限公司）；MCI-CHP-20树脂（日本三菱公司）；ODS-C18填料（加拿大SiliCycle公司）、SephadexLH-20（瑞典GEHealthcareBio-SciencesAB公司）；柱色谱硅胶（100～200200～300目）均为青岛海洋化工厂产品薄层硅胶为烟台江友硅胶发展有限公司生产；本实验所用试剂均为天津科密欧公司分析纯和色谱醇产品。药材于2009年7月采自陕西省安康市石泉县经陕西省药检所郭耀武教授鉴定