红细胞膜分离液和红细胞膜分离方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111537315A(43)申请公布日2020.08.14(21)申请号202010666271.6(22)申请日2020.07.13(71)申请人天津德祥生物技术有限公司地址300462天津市滨海新区经济技术开发区西区新业七街29号(72)发明人王丽王秀柱黄志刚王伟权庞伟(74)专利代理机构北京中济纬天专利代理有限公司11429代理人王俊(51)Int.Cl.G01N1/28(2006.01)G01N1/40(2006.01)C12N5/078(2010.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称红细胞膜分离液和红细胞膜分离方法(57)摘要本文提供了一种红细胞膜分离液，其包括腺嘌呤0.2-0.4g/L、海藻糖6-9g/L、氯化钠0.5-1.0g/L、以及磷酸二氢钠0.01g/L-0.03g/L。本文还提供了利用该分离液来制备红细胞膜的方法。通过该方法制备的红细胞膜基本上无血红蛋白残留。CN111537315ACN111537315A权利要求书1/1页1.红细胞膜分离液，包括：腺嘌呤0.2-0.4g/L、海藻糖6-9g/L、氯化钠0.5-1.0g/L、以及磷酸二氢钠0.01g/L-0.03g/L。2.如权利要求1所述的红细胞膜分离液，包括：腺嘌呤0.3g/L、海藻糖7g/L、氯化钠0.7g/L、以及磷酸二氢钠0.02g/L。3.制备红细胞膜的方法，包括：1)提供压积红细胞；2)以红细胞膜分离液悬浮所述压积红细胞，让所述红细胞破碎产生膜碎片；以及3)在所述红细胞分离液中通过离心沉淀所述膜碎片，其中所述红细胞膜分离液包括：腺嘌呤0.2-0.4g/L、海藻糖6-9g/L、氯化钠0.5-1.0g/L、以及磷酸二氢钠0.01g/L-0.03g/L。4.如权利要求3所述的方法，其中所述红细胞分离液包括腺嘌呤0.3g/L、海藻糖7g/L、氯化钠0.7g/L、以及磷酸二氢钠0.02g/L。5.如权利要求3所述的方法，其中在步骤1)和步骤2)之间还包括以所述红细胞分离液对所述压积红细胞进行洗涤。6.如权利要求3所述的方法，其中步骤2)中所用红细胞膜分离液与所述压积红细胞的体积比不低于10：1。7.如权利要求6所述的方法，其中所用红细胞膜分离液与所述压积红细胞的体积比不低于40：1。8.如权利要求3所述的方法，其中步骤2)包括在4℃下悬浮不少于2h。9.如权利要求3所述的方法，其中步骤3)中，在离心半径为10cm时，离心转速不低于9000r/min。10.如权利要求3所述的方法，其中所述红细胞为人红细胞。2CN111537315A说明书1/7页红细胞膜分离液和红细胞膜分离方法技术领域[0001]本文涉及用于制备红细胞膜的红细胞膜分离液，还涉及利用所述红细胞膜分离液来制备红细胞膜的方法。背景技术[0002]在生物学实验以及临床检验中，经常需要检测或使用红细胞膜抗原。这些膜抗原通常难以从红细胞膜上纯化出来，或者纯化后影响了其本身的生物学活性，例如抗原性。但是，在很多情况下，可以直接使用带有膜抗原的红细胞膜(或膜碎片)来进行这些试验。[0003]现有技术中红细胞膜的制备主要是通过低渗法制备。例如，CN101109755A公开了采用低渗法制备红细胞膜蛋白的过程，包括加预冷的0.01mol/LTric-HCl与红细胞混合(V：V=40：1)，4℃放置2h，再以9000r/min离心20min，重复多次，至无肉眼可见的红细胞为止。其他低渗方法还包括以蒸馏水或低渗PBS处理红细胞后再进行离心。另外，CN106754692公开了一种通过反复冻融来制备红细胞膜的方法。[0004]这些方法在红细胞膜制备过程中，受红细胞的洗涤、红细胞膜破碎和分离的影响，经常有不同程度的血红蛋白残留进入所制备的膜样品中。血红蛋白是红细胞的主要组成部分，膜样品中残留血红蛋白，为后续膜样品作为原料运用，例如在硝酸纤维素膜(NC膜)上的固定以及在样品的纯度上产生干扰。产生干扰的原因主要有三点：1)血红蛋白本身有颜色，膜样品固定NC膜上，呈现肉眼可见的颜色干扰；2)血红蛋白的卟啉环具有明显的氧化反应活性，可催化辣根过氧化物酶(HRP)的底物发生颜色反应，从而造成ELISA及部分HRP参与的层析检测干扰；3)血红蛋白的卟啉环本身具有自发荧光，且荧光反应比较强烈，对荧光层析反应存在干扰。[0005]现有红细胞膜制备方法并未考虑血红蛋白残留对后续实验的影响，也未能有效除去残留的血红蛋白。发明内容[0006]一方面，本文提供了一种红细胞膜分离液，其包括：腺嘌呤0.2-0.4g/L、海藻糖6-9g/L、氯化钠0.5-1.0g/L、以及磷酸二氢钠0.01g/L-0.03g/L。[0007]在一些实施方案中，所述红细胞膜分离液