适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111607590A(43)申请公布日2020.09.01(21)申请号202010513099.0(22)申请日2020.06.08(71)申请人申翌生物科技（杭州）有限公司地址311121浙江省杭州市余杭区仓前街道余杭塘路2636号1幢102室(72)发明人朱罗罗韩巧玲(74)专利代理机构无锡市汇诚永信专利代理事务所(普通合伙)32260代理人张欢勇(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒(57)摘要本发明提供一种适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒，提取试剂盒含有裂解结合液、磁珠溶液、消化酶、核酸释放剂、洗涤液、缓冲液。与常规的病毒核酸提取方法相比较，本方法操作步骤简单、安全，一次性加入裂解结合液和磁珠等组分，实现了裂解和结合同时进行，可以达到DNA和RNA共提；根据后续实验需要，可选择性保留DNA和/或RNA，且抑制物质残留少。试剂盒可采用预分装方式，结合核酸自动提取仪使用，整个流程下来仅需40min左右；无氯仿苯酚等有毒试剂。CN111607590ACN111607590A权利要求书1/2页1.一种适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：裂解结合液，其中裂解结合液包括30-70mMGuSCN，5-50mMTris-HCl、1-20mMEDTA、0.5-3MNaCl、质量百分比浓度为1-10％的PEG8000、质量百分比浓度为0.1-5％的TritonX-100；磁珠溶液，其中磁珠溶液包括磁珠和缓冲液；消化酶；核酸释放剂；第一洗涤液，其中第一洗涤液包括0.5-3MNaCl，2-5％PEG8000，20-50％乙醇；第二洗涤液，其中第二洗涤液包括10-200mMTris-HCI、1-20mMEDTA、质量百分比浓度为0.1-5％的TritonX-100、1-3MNaCI、50-80％乙醇；第四洗涤液，其中第四洗涤液包括10-200mMTris-HCI、1-20mMEDTA；洗脱液，其中洗脱液包括5-50mMTris-HCI、1-20mMEDTA。2.一种适用于全血，血清或血浆的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：裂解结合液，其中裂解结合液包括30-70mMGuSCN，5-50mMTris-HCl、1-20mMEDTA、0.5-3MNaCl、质量百分比浓度为1-10％的PEG8000、质量百分比浓度为0.1-5％的TritonX-100；磁珠溶液，其中磁珠溶液包括磁珠和缓冲液；消化酶；第一洗涤液，其中第一洗涤液包括0.5-3MNaCl，2-5％PEG8000，20-50％乙醇；第三洗涤液，其中第二洗涤液包括10-200mMTris-HCI、1-20mMEDTA、质量百分比浓度为0.1-5％的TritonX-100、2-5MLiCI、50-80％乙醇；第四洗涤液，其中第四洗涤液包括10-200mMTris-HCI、1-20mMEDTA洗脱液，其中洗脱液包括5-50mMTris-HCI、1-20mMEDTA。3.一种适用于全血，血清或血浆的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：裂解结合液，其中裂解结合液包括30-70mMGuSCN，5-50mMTris-HCl、1-20mMEDTA、0.5-3MNaCl、质量百分比浓度为1-10％的PEG8000、质量百分比浓度为0.1-5％的TritonX-100；磁珠溶液，其中磁珠溶液包括磁珠和缓冲液；消化酶；第一洗涤液，其中第一洗涤液包括0.5-3MNaCl，2-5％PEG8000，20-50％乙醇；第二洗涤液，其中第二洗涤液包括10-200mMTris-HCI、1-20mMEDTA、质量百分比浓度为0.1-5％的TritonX-100、1-3MNaCI、50-80％乙醇；第三洗涤液，其中第二洗涤液包括10-200mMTris-HCI、1-20mMEDTA、质量百分比浓度为0.1-5％的TritonX-100、2-5MLiCI、50-80％乙醇；第四洗涤液，其中第四洗涤液包括10-200mMTris-HCI、1-20mMEDTA；洗脱液，其中洗脱液包括5-50mMTris-HCI、1-20mMEDTA。2CN111607590A权利要求书2/2页4.根据权利要求1到3任一所述的适用于全血，血清或血浆的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，试剂盒中的试剂采用预分装的形式。5.根据权利要求1到3任一所述的适用于全血，血清或血浆的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，裂解结合液中含有50mMGuSCN。6.根据权利要求1到3任一所述的适用于全血