一种百山祖冷杉高效嫁接的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111670703A(43)申请公布日2020.09.18(21)申请号202010585124.6A01G24/28(2018.01)(22)申请日2020.06.23A01G24/15(2018.01)A01G24/22(2018.01)(71)申请人浙江大学A01H4/00(2006.01)地址310058浙江省杭州市西湖区余杭塘A01N37/10(2006.01)路866号A01N43/90(2006.01)(72)发明人陈利萍刘柯袁璐杨洋A01P21/00(2006.01)吴友贵于明坚金孝锋帅辉王挺进陈小荣刘胜龙叶珍林杨锴斌(74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公司33200代理人邱启旺(51)Int.Cl.A01G2/30(2018.01)A01G2/35(2018.01)权利要求书2页说明书5页附图1页(54)发明名称一种百山祖冷杉高效嫁接的方法(57)摘要本发明公开了一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，旨在解决百山祖冷杉对低海拔地区气候条件适应性差的问题。本发明以百山祖冷杉试管苗为接穗，选取适应中低海拔地区生长的冷杉属其他物种试管苗为砧木，在保留砧木顶端分生组织的基础上，利用植物生长调节剂处理砧木与接穗接触表面后，嫁接百山祖冷杉的接穗，经过嫁接部位愈合、炼苗、移栽驯化等阶段获得百山祖冷杉嫁接苗。本发明利用百山祖冷杉和同属其他物种的无菌试管苗，短时间内获得较多的试管嫁接苗，且嫁接部位愈合速度快，成活率高，能够改善百山祖冷杉在自然条件下分布范围狭窄的问题。该方法快速高效，对改良百山祖冷杉，提高百山祖冷杉环境适应性，扩大百山祖冷杉适生海拔范围具有重要意义。CN111670703ACN111670703A权利要求书1/2页1.一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采摘百山祖冷杉与日本冷杉的球果，分别剥取其未成熟胚及胚乳进行培养，获得无菌的试管苗；(2)在超净工作台上，依次将步骤1得到的试管苗置于体视显微镜下，利用无菌手术刀和镊子对其进行切割。然后放置于含有湿润滤纸的培养皿中备用；其中，日本冷杉的试管苗作为砧木，切割时保留顶端分生组织；百山祖冷杉的试管苗作为接穗。(3)在无菌条件下，将准备好的砧木和接穗放入含有植物生长调节剂水溶液中进行浸泡，然后将砧木和接穗放置于体视显微镜下进行试管嫁接，并用硅胶嫁接管固定嫁接部位；(4)嫁接完成后，将嫁接试管苗接种至培养基上进行弱光培养，砧木和接穗愈合后，将其移至正常光照条件下培养；(5)嫁接苗培养30d后，将嫁接试管苗进行高光强炼苗，并打开瓶口，使其逐渐适应外界环境。3d后，洗去植株根部附着的培养基，将植株移栽至人工配制的混合培养基质中，浇水至基质湿润，于人工气候箱中培养。2.根据权利要求1所述的一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于：在所述步骤(1)中，所述百山祖冷杉和日本冷杉的球果采摘时间为8月中旬。3.根据权利要求1所述的一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于：在所述步骤(1)中，无菌试管苗苗龄是10～15d。4.根据权利要求1所述的一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于：在所述步骤(2)中，作为砧木的日本冷杉试管苗的切割方法为：在超净工作台上，将日本冷杉的无菌试管苗置于体视显微镜下，利用无菌手术刀将试管苗的顶端分生组织沿中心轴纵切0.5～0.7cm。5.根据权利要求1所述的一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于：在所述步骤(2)中，作为接穗的百山祖冷杉试管苗的切割方法为：左手持镊子固定百山祖冷杉无菌试管苗，右手持手术刀，在试管苗胚根上方0.5cm处切长0.5cm的“V”字型切口，保留切口以上的部分，将其放置于含有湿润滤纸的培养皿中备用。6.根据权利要求1所述的一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，所述含有植物生长调节剂水溶液的配方是：细胞分裂素6-BA的浓度为2mg·L-1，生长素NAA的浓度为1mg·L-1。7.根据权利要求1所述的一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，所述试管嫁接的方法为：首先，将硅胶嫁接管从砧木日本冷杉根端套入至切口的下方。双手持镊子，在体视显微镜下，将接穗插入砧木的切口中，然后将砧木上预留的硅胶管上滑至嫁接部位。8.根据权利要求1所述的一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于：在所述步骤(4)中，所述培养基以DCR(GuptaandDurzanmedium)为基本培养基，另外添加蔗糖、琼脂、酶水解酪蛋白等，蔗糖、琼脂、酶水解酪蛋白的浓度分别为20g·L-1、8g·L-1、500mg·L-1，培养基的pH为5.8。9.根据权利要求1所述的一种百山祖冷杉高效嫁接的方法，其特征在于：在所述步骤(4)中，所