一种花生突变体创制方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111670806A(43)申请公布日2020.09.18(21)申请号202010622787.0(22)申请日2020.07.01(71)申请人山东省花生研究所地址266000山东省青岛市李沧区万年泉路126号(72)发明人苑翠玲单世华孙全喜李春娟闫彩霞赵小波王娟张浩(74)专利代理机构北京中北知识产权代理有限公司11253代理人王皎(51)Int.Cl.A01H1/04(2006.01)A01H1/06(2006.01)A01H6/54(2018.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种花生突变体创制方法及应用(57)摘要本发明涉及一种花生突变体创制方法及应用，可用于创制表型丰富的花生突变群体。包括如下步骤：(1)将花生种子用浓度为0.4～0.5％EMS水溶液浸泡，摇床处理8～10h；(2)流水冲洗种子3～5h，去除残留的EMS；(3)将处理好的种子在光照培养箱进行萌发；(4)将发芽露白的种子挑出来进行种植；(5)种植M1代，花生生长期间，对突变体的表型进行调查，统计各突变表型所占群体的比例；(6)M2代每个单株随机选取1粒种子种植，对突变体的表型进行调查，统计各突变型所占群体的比例，获得表型丰富的花生EMS诱变群体。通过本发明可获得株高、株型、分枝数、荚果大小等发生变异的EMS诱变群体。CN111670806ACN111670806A权利要求书1/1页1.一种花生突变体创制方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将花生种子用含0.4～0.5％浓度的EMS水溶液浸泡，摇床处理8～10h；(2)步骤(1)处理完后，流水冲洗种子3～5h，去除残留的EMS；(3)步骤(2)冲洗完后，将处理好的种子放进在光照培养箱进行萌发；(4)将发芽露白的种子挑出来进行种植；(5)种植M1代，花生生长期间，对突变体的表型进行调查，统计各突变表型所占群体的比例；(6)M2代每个单株随机选取1粒种子种植，对突变体的表型进行调查，统计各突变表型所占群体的比例，获得表型丰富的花生EMS诱变群体。2.根据权利要求1所述的一种花生突变体创制方法，其特征在于：所述花生种子为花育22号的种子。3.根据权利要求1所述的一种花生突变体创制方法，其特征在于：步骤(1)中用含0.4％质量浓度的EMS水溶液浸泡，摇床处理10h。4.根据权利要求1或3所述的一种花生突变体创制方法，其特征在于：所述摇床的条件是，温度25℃，转速105rpm。5.根据权利要求1所述的一种花生突变体创制方法，其特征在于：步骤(2)中，自来水冲洗种子4h。6.根据权利要求1所述的一种花生突变体创制方法，其特征在于：步骤(5)和步骤(6)中突变体的表型包括叶色、叶形、绒毛、株高、株型、开花期、花色和荚果大小。7.根据权利要求1所述的一种花生突变体创制方法，其特征在于：步骤(6)中获得的表型有植株变高、植株矮小、株型匍匐、株型半匍匐、分支变少、分支变多、生长期变长、生长期缩短、荚果和/或种子变大、荚果和/或种子变小、叶片失绿、大叶、小叶、畸变叶、绒毛变异、茎变粗、茎变细、开花习性转变。8.根据权利要求7所述的一种花生突变体创制方法，其特征在于：所述绒毛变异指的是绒毛变长或变多。9.根据权利要求7所述的一种花生突变体创制方法，其特征在于：所述开花习性转变指的是由连续开花突变为交替开花。10.根据权利要求1所述的一种花生突变体创制方法获得的突变体在花生遗传育种及基因克隆中的应用。2CN111670806A说明书1/5页一种花生突变体创制方法及应用技术领域[0001]本发明涉及一种花生突变体创制方法及应用，利用该方法可以创制变异表型丰富的花生突变群体。背景技术[0002]花生是我国重要的油料作物和经济作物，也是主要的出口创汇农产品。培育高产、优质、专用型花生新品种一直是花生育种工作者最重要的研究方向。目前，花生育种的主要手段是杂交育种。但由于我国育成的花生品种存在专用性差，基因源大多来自“伏花生”和“狮头企”，可用的种质资源有限等问题。传统的以杂交育种为主的技术手段和现有的种质资源已很难提高育种效率。诱变技术具有突变效率高、突变范围广、操作简单等诸多优点，已成为创制新种质的重要手段。因此，应用诱变技术创制新种质，是加速花生高产、优质、专用育种的重要方法。[0003]EMS诱变具有操作方便、剂量易控制、对基因组损伤轻、突变率高等优点，已成为作物育种运用最为广泛的诱变技术。此外，EMS诱变的一个重要用途是通过构建突变饱和、表型丰富的突变体库，用TILLING技术筛选突变基因。TILLING技术是在EMS诱变群体创建结合PCR检测技术基础上发展起来的点突变检测的反向遗传学方法，具有高通量、低成本、不依赖于基因型等优点