小鼠树突状细胞的体外培养与鉴定.docx

小鼠树突状细胞的体外培养与鉴定作者：田蓉李巍于继云刘玉峰【关键词】树突细胞Invitrocultureandcharacterizationofmousespleendendriticcells【Abstract】AIM:Toexploreandoptimizethemethodsforinvitrocultureofmousedendriticcells(DC)thatwerethenobservedmorphologicallyandidentifiedbiologically.METHODS:Micewereinjectedwith200mg/kgcyclophosphamidethroughthetailveinandweresacrificed8dlater.Spleencellswereculturedwithordinarymethodsfirstlyand3dlaterconditionalmediumcontainingIL4GMCSFwasaddedandTNFαwasaddedatday5.Atday8cellsweresubjectedtophasecontrastmicroscopescanningelectronmicroscopeandtransmissionelectronmicroscopeanalysis.Atday357cellsweresubjectedtoFACSfordetectionofcellsurfacemarkers.RESULTS:CulturedcellsdisplayedatypicalDCphenotypeinmorphologicalanalysisandFACSshowedthesecellsexpressingsuchDCmarkersasCD11cCD86ⅠAbH2D6.CONCLUSION:UsingofIL4GMCSFTNFαasstimulatorsinthemousespleencellculturecanobtainDCwithhighqualityandhighpuritywhichmakesafoundationforfutureresearchonthebasicandclinicalusageofDC.【Keywords】dendriticcells;cytokines;MHCⅡmolecule【摘要】目的：探索、优化体外诱导和扩增小鼠树突状细胞（DC）的方法并进行形态学观察和生物学鉴定.方法：应用环磷酰胺200mg/kg经尾静脉注射Balb/c小鼠8d后处死小鼠常规培养脾细胞第3日加入含有IL4GMCSF细胞因子的条件培养液第5日补加TNFα第8日制备标本进行相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察并分别在培养第357日经流式细胞仪检测成熟细胞表面标志.结果：刺激培养细胞经相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察具有典型的DC形态流式细胞仪检测发现细胞表面表达CD11cCD86ⅠAbH2D6标志物.结论：在小鼠脾脏细胞培养中加入IL4GMCSFTNFα等刺激可获得足量、较高纯度的DC为DC的基础研究与临床应用奠定了基础.【关键词】树突细胞；细胞因子；MHCⅡ类分子0引言自从Steinman等于1973年发现树突状细胞（dentriticcellDC）以来［1］DC作为体内最重要的抗原提呈细胞其强大的提呈抗原作用和启动初始T细胞的能力日益引起国内外学者的关注.特别是DC与肿瘤免疫的密切关系以及在抗肿瘤方面的独特功能使其成为肿瘤免疫研究的一个重要领域.DC来源于骨髓CD34+细胞［2］获得一定量有功能的DC是深入研究其生物学功能的关键然而DC在体内分布散在含量极低在动物和人外周血中尚不足白细胞总量的1%.目前体外培养DC的方法尚不尽人意在很大程度上限制了对DC基础和临床工作的开展.我们在体外培养扩增了Balb/c小鼠的DC细胞在培养中添加IL4GMCSFTNF等刺激并通过相差显微镜、电镜观察和流式细胞仪检测分析对所培养细胞进行鉴定为优化DC的体外培养方法进行积极的探索.1材料和方法1.1材料环磷酰胺购自上海华联公司；荧光标记抗