抗精子抗体的测定方法及临床意义.docx

抗精子抗体的测定方法及临床意义摘要：目的：分析抗精子抗体的测定方法推进其医学研究进展在临床中得到更广泛地应用。方法：在实验室环境下采用间接法原理的酶促化学发光免疫分析方法。结论：JETLIA-962型微孔板单光子计数仪或其他发光免疫分析仪包括振荡器、洗板机、水浴箱可对抗精子抗体进行精确的测定使精子质膜颗粒的流动性而阻碍获能阻止精子穿过透明带与卵子的结合引起受精的失败引起不育不孕具有重要意义。关键词：抗精子抗体；检验方法；临床意义【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1672-8602（2015）03-0110-02抗精子抗体（ASA）采用间接法原理的酶促化学发光免疫分析方法。纯化的相应抗原物质预先结合在微孔板的表面加入待测样本后样本中相应的抗体与微孔板表面的抗原特异性结合洗涤后形成的免疫复合物与随后加入的辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人单克隆抗体相结合这样在微孔板表面形成了抗原一特异性抗体一酶标记二抗的免疫复合物洗涤后加入发光底物测定相对发光强度与同时测定的阴性对照品相比较确定样本中是否存在相应抗体。下面将抗精子抗体的测定方法及临床意义分析汇报如下。1检验准备1.1标本采集采血方法：采集无抗凝静脉血2～3ml也可采集EDTA（1.5g/L全血）、枸橼酸钠（10.9mmol/L全血）或肝素（20～30U/ml全血）作抗凝剂的血浆。标本保存：室温保存及时检测。样本在15～25℃放置不超过4h；2～8℃保存不超过12h；-20℃或低于～20℃保存不超过2个月避免反复冻融；复融的冻存样本应充分平衡至室内温度后方可用于测定。1.2注意事项推荐选用血清测定前应平衡至室内温度。样本中含有叠氮钠、微型颗粒物会影响实验结果同时应避免使用乳糜血、高蛋白血、低胆红素血、轻微溶血或生物污染的血液标本。1.3试剂试剂来源：采用北京源德生物医学工程有限公司提供配套试剂。试剂组成：包被板：8×12条（96人份）或8×6条（48人份）；酶结合物2瓶（96人份）或1瓶（48人份）；阳性对照1瓶；阴性对照l瓶；样本稀释液1瓶；发光液Al瓶；发光液Bl瓶；浓缩洗涤剂1瓶。1.4试剂准备：试剂应置室温平衡30min。用蒸馏水将浓缩洗涤液稀释20倍后使用。液体试剂使用前应充分混匀。1.5试剂保存：未开封试剂盒及其各组分在2～8℃可保存至有效期。开封使用后酶结合物、阴性对照、阳性对照、样本稀释液、洗涤液可于2～8℃稳定4周；包被板、发光液稳定8周。1.6仪器：采用JETLIA-962型微孔板单光子计数仪或其他发光免疫分析仪包括振荡器、洗板机、水浴箱。2检验步骤2.1实验设计：根据阴性、阳性对照、质控品及样本数量截取微孔板条在板架上放好微孔板条（阴性对照品至少设3孔阳性对照品至少设l孔）。2.2加样：在阴性、阳性对照品孔位中分别加入l00μl的阴性、阳性对照。在相应的待测样本孔位中分别加入lOOμl的样本稀释液和lOμl样本或质控品（建议先加入样本稀释液）加入样本时应吸打混匀（样本孔会变蓝提示已加样）。2.3温育：盖上封板膜在振荡器上振荡片刻（不少于5s）置37℃水浴箱中温育30min。2.4洗板：机洗或手洗。吸出或倒出反应液加入洗涤液洗5次（每次加入洗液后静置时间不少于30s）洗涤液量每次每孔不少于300μl末次洗板后将板拍干。2.5加酶结合物：每孔依次加入lOOμl酶结合物。2.6温育：同步骤2.3。2.7洗板：同步骤2.4。2.8检测：用加样器向每孔中分别加入发光液A、B液各50μl（共lOOμl）振荡片刻（不少于5s）避光放置（5±0.5）min测定相对发光强度。2.9设定孔位信息：在软件支持下将各孔位按实验需要进行定义并按软件提示输入相关信息。3注意事项3.1环境相对湿度低于60%时应关注样本及液体试剂蒸发浓缩对实验结果的影响。3.2试剂盒应在有效期内使用不可混用不同批号试剂及过期试剂。使用前试剂需平衡至室温。样本和试剂不能长时间于室温放置使用后剩余组分应迅速放回2～8℃保存。3.3实验过程中发光液和酶标记物要避免强光直射。3.4试剂和样本使用前要充分混匀并避免起泡沿孔壁加样以避免外溅或产生气泡。3.5孵育及振荡过程中要避免微孔内水分的蒸发应及时盖上盖板膜。3.6洗板时每次加入洗液量不能太多以免造成溢液污染。3.7加入发光液后避光放置（5±