影响杂交兰组培快繁各个阶段主要因素的研究.docx

影响杂交兰组培快繁各个阶段主要因素的研究摘要：该试验以3个杂交兰品种为试验对象对影响杂交兰组培快繁各个阶段的主要因素进行了研究。结果表明：基因型是影响杂交兰组培快繁的主要因素其次是激素组合。通过研究影响杂交兰组培快繁的因素为杂交兰育种和规模化生产提供技术支持。关键词：杂交兰;组培快繁;阶段;因素中图分类号S68文献标识码A文章编号1007-7731（2015）13-28-02杂交兰在我国是指大花蕙兰与国兰之间经过杂交培育出的兰花新品种[1]。它既具有大花蕙兰的花大、色艳、花期长的优点又具有国兰的幽香、典雅和韵味既满足欧美消费者的消费需求又符合中国、日本、韩国等亚洲人的审美情趣;更重要的是杂交兰克服了组培快繁和新品种选育等核心技术难题能进行产业化生产能够快速生产满足市场需求。因此杂交兰自投入市场以来受到欧、美及日本、韩国、中国等亚洲消费者的普遍青睐形成量价齐升的态势是市场前景非常广阔的一个新兴年宵花品种。1材料与方法1.1试验材料杂交兰品种绿宝石、桃花、紫元素3个品种当年生新芽。1.2试验方法1.2.1外植体消毒选择生长健壮、无病虫害的母株控制浇水14d将当年生新芽从母株基部小心切下去除外层叶片并将叶片从顶部切断保留5cm左右长度。用饱和洗衣粉溶液浸泡30min左右再剥去一层叶片用流水清洗30min左右。将外植体拿到超净工作台上用刀片将外植体截断从顶端截短至2cm左右从基部将黑色部分切除。先放到70%酒精中浸泡5s再转到含0.1%升汞溶液中浸泡5～10min然后用无菌水清洗4～5次用消毒刀剥去所有叶片从基部将短缩茎切成1cm大小备用。1.2.2原球茎诱导将消毒后的外植体正向插入原球茎诱导培养基中。原球茎诱导培养基为以MS为基本培养基激素组合分别为①6-BA1.0mg/L+NAA0mg/L②6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L③6-BA0mg/L+NAA0.2mg/L。先放在暗光下培养1～2d然后转到光照下培养30～40d诱导原球茎培养条件为光照强度40～60lx光照时间16h。1.2.3原球茎增殖与分化将原球茎转到继代培养基上继代增殖与分化继代周期为40～50d。增殖分化以MS为基本培养基激素组合分别为①6～BA2.0mg/L+NAA0mg/L②6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L③6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L④6-BA0mg/L+NAA0.1mg/L。先在暗光下放置1～2d再转到光照下培养。培养条件同原球茎诱导。1.2.4生根将长度4cm以上生长健壮的单芽切下转到生根培养基上诱导生根。生根培养基为1/2MS附加①NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L②NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L③NAA0.5mg/L+IBA0mg/L活性炭2g/L蔗糖20g/L培养条件同上。2结果与分析2.1不同消毒时间对外植体灭菌效果的影响外植体消毒后7d在部分外植体表面和与培养基接触部分长出细菌部分外植体表面白化、失绿表明消毒过久外植体死亡。统计各品种在不同消毒时间下的消毒成功率如表1所示。随着消毒时间的增加外植体污染率逐渐降低但因消毒造成白化、死亡的外植体数量也在增加。对于此3个品种消毒8min时外植体消毒效果最佳。表1不同消毒时间对外植体灭菌效果的影响[品种＼&消毒时间（min）＼&外植体数（个）＼&污染数（个）＼&成功个数＼&消毒成功率（%）＼&红美人＼&5＼&13＼&6＼&7＼&53.85＼&＼&8＼&18＼&5＼&13＼&72.22＼&＼&10＼&16＼&3＼&11＼&68.75＼&绿宝石＼&5＼&15＼&7＼&8＼&53.33＼&＼&8＼&18＼&5＼&13＼&72.22＼&＼&10＼&20＼&3＼&14＼&70.00＼&桃花＼&5＼&12＼&4＼&8＼&66.67＼&＼&8＼&16＼&3＼&13＼&81.25＼&＼&10＼&17＼&3＼&12＼&70.59＼&]2.2不同培养基对杂交兰原球茎诱导的影响外植体在原球茎诱导培养基上培养25d左右陆续有外植体诱导出原球茎其中在②号培养基上诱导率最高3个品种中‘红美人’原球茎诱导率最高绿宝石次之桃花诱导率最低。图1不同培养基上杂交兰原球茎诱导率2.3不同激素水平对杂交兰原球茎增殖与分化的影响原球茎诱导出来50d左右时将原球茎切下大的原球茎从中间切割成0.5cm直径的小块转接到原球茎增殖与分化培养基上结果如表2所示。3个品种在②、③两个培养基上增殖率最高40～50d增殖率可达3.0左右