垂盆草总黄酮含量测定.docx

垂盆草总黄酮含量测定【摘要】目的建立垂盆草中总黄酮含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法测定波长为501nm。结果总黄酮检测浓度在0.01036～0.08288mg/mL范围内与吸光度线性关系良好(r=0.9998)平均加样回收率为98.62%(RSD=1.11%n=6)。结论本方法用于垂盆草中总黄酮的含量测定结果准确、可靠、稳定。【关键词】紫外分光光度法；垂盆草；总黄酮；含量测定垂盆草(SedumsarmentosumBunge)又称卧茎景天系景天科多年生草本植物垂盆草的新鲜或干燥的全草我国大部分地区均有分布。该药味甘、淡、性凉具有清热解毒、利尿消肿、排脓生肌之效主治丹毒溃疡小便不利及急、慢性肝炎等。据有关文献报道垂盆草中含有氰苷、黄酮类、甾醇类和三萜类等化合物［12］。潘金火等［34］对垂盆草的保肝降酶活性成分进行了一系列的研究证明垂盆草中具有保肝降酶作用的活性成分主要存在于H2O部分和nBuOH部分（主要含苷类和总黄酮）进而确认其中的总黄酮是垂盆草中保肝降酶的主要活性组分之一。本文采用经典的比色法对垂盆草中的总黄酮含量进行测定以为其后继的开发利用提供依据。1仪器与试药UV2401型可见紫外分光光度计(日本岛津公司)；bp211D型十万分之一天平(德国赛多利斯公司)；索式提取器等。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所批号:086-9303)；垂盆草(购于安徽省毫州市药材总公司经南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授鉴定为SedumsarmentosumBunge的干燥全草粉碎至40～60目)；亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、乙醇等为分析纯。2方法与结果2.1对照品溶液的制备精密称取于120℃下减压干燥至恒重的芦丁对照品10.36mg置50mL容量瓶中加80%（体积分数）乙醇35mL超声使之完全溶解冷却至室温以80%（体积分数）乙醇稀释至刻度摇匀得浓度0.2072mg/mL的芦丁对照品溶液冷藏备用。2.2供试品溶液的制备精密称取垂盆草药材粉末1.0g置索氏提取器中加石油醚（60～90℃）100mL在85℃水浴温度条件下回流提取至无色弃去石油醚药渣挥干石油醚再用80%（体积分数）乙醇100mL在100℃水浴温度条件下回流提取6h冷却后用80%（体积分数）乙醇定容至100mL备用。2.3定性鉴别反应2.3.1氨水反应取样品溶液点于滤纸上将滤纸在氨水上方熏15min立即置紫外光下观察(254nm)呈黄绿色荧光斑点。2.3.2三氯化铝反应取样品溶液点于滤纸上滴加5%（质量分数）三氯化铝甲醇溶液吹干呈灰黄色在紫外光下(254nm)观察呈黄绿色荧光斑点。2.3.3盐酸-镁粉反应取样品1mL加少许镁粉再滴加几滴浓盐酸水浴加热2min后显红色。2.4测定波长的选择精密量取对照品溶液3mL和供试品溶液5mL分别置10mL容量瓶中加5%（质量分数）亚硝酸钠溶液0.4mL混匀放置6min；加10%（质量分数）硝酸铝溶液0.4mL放置6过min；加4%（质量分数）氢氧化钠溶液1.0mL用80％（体积分数）乙醇定容至刻度摇匀放置15min以80％（体积分数）乙醇为空白同法配制空白对照液。在400～700nm波长处扫描对照品与供试品溶液显色后均在501nm左右波长处有最大吸收故将501nm作为测定波长。紫外光谱图见图1。1．供试品;2．芦丁对照品;3．阴性对照图1紫外扫描图谱（略）Fig.1UVSpectrum2.5专属性试验取“2.2”项下供试品溶液5mL置10mL容量瓶中加80%（体积分数）乙醇至刻度以80%（体积分数）乙醇溶液为空白对照液在400～700nm波长处扫描。未经显色的供试品在501nm左右波长处基本无吸收说明此显色方法的专属性较强。紫外扫描光谱见图1。2.6标准曲线的绘制分别精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL各置10mL容量瓶中分别加80%（体积分数）乙醇至5mL加入5%亚硝酸钠溶液0.4mL混匀静置6min；加入10%（质量分数）硝酸铝溶液0.4mL摇匀静置6min加入4%（质量分数）氢氧化钠溶液1.0mL再加80%（体积分数）乙醇至刻度摇匀放置15min以80％（体积分数）乙醇为空白同法配制空白对照液。分别于501nm波长处测定吸光度以吸光度值(A)对质量浓度(ρ)进行线性回归得回归方程ρ=0.0865A+0.0012(r=0.9998)。结果表明芦丁检测浓度在0.01036～0.08288mg/mL范围内线形关系良好。