山药多糖预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的抗氧化保护作用.docx

山药多糖预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的抗氧化保护作用[摘要]目的探讨山药多糖预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法选择健康雄性SD大鼠30只随机分为3组：假手术组、肾缺血再灌注损伤组、山药多糖预处理组每组各10只复制大鼠肾缺血再灌注损伤模型山药多糖预处理组于造模前1周给予200mg/kg山药多糖灌胃。肾缺血再灌注6h后检测血清尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）的含量测定肾组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）的含量。结果与假手术组相比肾缺血再灌注损伤组和山药多糖预处理组血清BUN、SCr含量升高（P<0.01）肾组织SOD、GSH-Px活性降低（P<0.01）MDA含量升高（P<0.01）；与肾缺血再灌注损伤组相比山药多糖预处理组的血清BUN、SCr含量降低（P<0.01）肾组织SOD、GSH-Px活性升高（P<0.01）MDA水平降低（P<0.01）。结论山药多糖预处理能改善肾缺血再灌注损伤其机制与山药多糖抗氧化作用有关。[关键词]缺血再灌注损伤；抗氧化；山药多糖[中图分类号]R692.5[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2013）03（c）-0021-03肾缺血再灌注损伤（renalischemiareperfusioninjuryRIRI）是临床上经常遇到的问题。肾是高灌注器官对缺血缺氧比较敏感因此如何降低由于RIRI所引起的肾损害促进恢复已成为一个重要的研究课题。急性RIRI与氧自由基关系密切[1-2]再灌注引起的氧自由基大量生成而引发的脂质过氧化作用激发了肾小管上皮细胞的凋亡及坏死[3]从而影响患者肾功能的恢复。山药多糖是山药的主要活性成分已有研究证明山药多糖具有较强的抗氧化活性作用[4-5]但其防治RIRI方面未见报道。本实验通过复制大鼠RIRI模型探讨山药多糖对RIRI肾功能的影响及其保护机制为临床用药提供实验依据。1材料与方法1.1材料1.1.1动物SPF级雄性SD大鼠30只体重（200±20）g由湖南中医药大学实验动物中心提供并饲养于湖南中医药大学SPF级动物房动物合格证号：SCXK（湘）2009-0001。1.1.2试剂谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒购自南京建成生物工程研究所其余试剂均为国产分析纯。1.1.3药物制备淮山药购自湖南中医药大学第一附属医院药剂科。干山药片洗净加双蒸水置40℃浸泡4h用匀浆器匀浆按1∶8加双蒸水40℃提取2h用4层纱布过滤冷却后取上清4000r/min离心10min去杂质于80℃浓缩加乙醇浓度至80%时多糖析出静置后出现沉淀4000r/min离心10min回收乙醇沉淀用无水乙醇提取3次冷冻干燥后为灰白色山药粗多糖用蒽酮法测定山药多糖的含量为18%。1.2方法1.2.1动物分组将大鼠随机均分为3组每组10只：①假手术组：麻醉后开腹分离双侧肾蒂暴露60min后关闭腹腔。②肾缺血再灌注组：复制RIRI模型[6]。③山药多糖预处理组：复制RIRI模型。术前1周山药多糖预处理组以200mg/kg山药多糖灌胃假手术组和肾缺血再灌注组以等容量生理盐水灌胃1次/d。1.2.2复制肾缺血-再灌注损伤模型术前12h禁食自由饮水腹腔注射1%戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉切除右侧肾脏以避免右侧肾脏的代偿作用暴露左侧肾脏并游离肾蒂夹闭肾动静脉60min松开动脉夹后如果肾脏由紫黑色转为红色说明肾缺血-再灌注模型复制成功如果松开动脉夹5min后未变成红色说明灌注不成功弃去不用。再灌注6h后处死动物。1.2.3血清尿素氮、血清肌酐测定各组大鼠在再灌注6h后分别于腹主动脉取血3mL3000r/min离心15min后分离血清分装后-70℃冰箱保存待测。血清肌酐（Scr）测定采用碱性苦味酸比色法血清尿素氮（BUN）测定采用二乙酰一肟显色法。1.2.4肾组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量测定大鼠处死后取肾组织置于匀浆器中按重量体积比加入9倍的生理盐水制备成10%的肾组织匀浆立即放入-20℃冰箱中保存。按照南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书测定肾组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量。1.3统计学方法采用SPSS19.0统计学软件进行数据分析计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示多组间比较采用方差分析组间两两比较采用LSD-t检验；以P<0.05为差异有统计