半枝莲总黄酮的实验研究.docx

半枝莲总黄酮的实验研究《湘潭大学自然科学学报》2014年第二期1实验方法1．1标准品溶液的制备取恒重的芦丁对照品10mg于100mL容量瓶中加70％乙醇溶解并定容摇匀即成标准品溶液．1．2样品溶液的制备准确称取半枝莲干粉1．000g加到100mL蒸馏瓶中加70％乙醇45mL加适量活性炭回流冷至室温转入50mL量瓶中加70％乙醇定容摇匀即得样品溶液．1．3最大吸收波长的选择取3支10mL容量瓶1号为空白对照2、3号中分别加入1mL样品液和标准品溶液：依次加0．3mL5％NaNO2溶解静置；分别加0．3mL10％Al（NO3）3摇匀静置；再分别加4mL4％NaOH用70％乙醇定容至10mL摇匀静置后在400～600nm进行波长扫描．1．4标准曲线的绘制精密吸取芦丁标准品溶液0．00、1．00、2．00、3．00、4．00、5．00mL于6个容量瓶中：分别加入0．3mL5％NaNO2溶解静置；然后分别加0．3mL10％Al（NO3）3摇匀静置；再分别加4mL4％NaOH用70％乙醇定容摇匀静置15min后最大吸收波长处测定其吸光度．以标准品的质量浓度为横坐标吸光度为纵坐标绘制标准曲线．1．5总黄酮的半仿生法提取提取工艺如下：原料烘干粉碎脱脂（石油醚）减压抽滤称量超声波辅助半仿生法提取减压抽滤脱色（活性炭）定容显色测定黄酮类化合物的提取率．根据仿生学原理模仿人体胃、小肠其pH值分别为2．0、7．5．准确称取1．0000g半枝莲样品加适量石油醚脱脂过滤．乙醇－水作为浸取剂．第一次提取：模拟人体胃pH值用1mol／LHCl将浸取剂调pH为2．0在一定提取时间、温度、料液质量比、乙醇浓度、超声功率下进行总黄酮的提取过滤保留虑液、滤渣．第二次提取：模拟人体小肠pH值用磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲溶液将浸取剂调pH为7．5在第一次提取条件下用滤渣进行第二次总黄酮提取过滤保留虑液．合并2次提取液加适量活性炭脱色过滤浓缩定容．1．6总黄酮提取率的计算式中：C为提取液中黄酮类化合物的浓度（mg／mL）；m为样品质量（g）；V为提取液定容体积（mL）；n为稀释倍数．2结果与分析2．1最大吸收波长按1．3．3所述制备试样方式进行试样分光光度吸收波长扫描测其吸光度结果如图1所示：由图1可知芦丁标准品溶液和半枝莲样品溶液在510nm处均具有最大吸收峰值且光谱形状极为相似形成的络合物在常温下稳定性较好满足分光光度测定的基本要求．因此实验选定510nm作为测定波长．2．2标准曲线按1．3．4所述制备芦丁标准品溶液进行分光光度吸收波长扫描测其吸光度结果如图2所示．对图2芦丁标准吸光度曲线进行线性回归得线性回归方程y＝11．133x＋0．0066R2＝0．9993．结果表明芦丁标准品在0．01～0．05mg／mL时质量浓度与吸光度呈良好的线性关系．2．3提取半枝莲总黄酮的影响因素采用超声辅助半仿生法提取半枝莲总黄酮其影响因素有超声功率、提取时间、料液质量比、提取温度和乙醇浓度等下面通过实验确定这些影响因素的最佳参数．2．3．1超声功率的影响称取半枝莲药品1．0000g分别采用不同的超声功率50W、60W、70W、80W和90W在提取时间25min、料液质量比1∶20、温度60℃、乙醇体积分数70％条件下进行2次提取合并2次提取液定容后测其吸光度计算黄酮类化合物提取率结果如图3．由图3可知在50～60W超声功率条件下总黄酮提取率随功率增大而增大60W时提取率最大之后总黄酮提取率下降且下降趋势较大故最佳超声功率为60W．2．3．2提取时间的影响称取半枝莲药品1．0000g采用不同的超声提取时间20min、25min、30min、35min和40min在超声功率为60W、料液质量比为1∶20、提取温度为60℃、乙醇体积分数为70％条件下进行2次提取合并2次提取液定容后测其吸光度计算黄酮类化合物提取率结果如图4所示．由图4可知提取时间由20min延长到25min时提取率增加且幅度较大当提取率到30min时提取率达到最大再延长时间提取率下降但趋势缓慢．这可能是时间越长超声波对细胞膜破碎作用进一步加大粘液等杂质相应增加使溶液粘度增大影响了有效成分的溶出故最佳提取时间为30min．2．3．3料液质量比的影响称取半枝莲药品1．0000g料液质量比（样品与溶剂质量比）分别为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30和1∶35在超声功率为60W、提取时间为30min、提取温度为60℃、乙醇体积分数为70％条件下进行2次提取合并2次提取液定容后测其吸光度计算黄酮类化合物提取率结果如图5所示．由图5可知