转化细胞的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112368372A(43)申请公布日2021.02.12(21)申请号201980040836.5大西章仁明上纯子佐藤晋(22)申请日2019.06.18(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有(30)优先权数据限公司442052018-1152002018.06.18JP代理人伍志健林明校(85)PCT国际申请进入国家阶段日(51)Int.Cl.2020.12.17C12N5/10(2006.01)C12N15/87(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/JP2019/0241342019.06.18(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/244895JA2019.12.26(71)申请人巴尔工业株式会社地址日本国大阪府申请人株式会社爱基创国立大学法人爱媛大学(72)发明人神野雅文加藤英政德泽佳美权利要求书1页说明书15页附图11页(54)发明名称转化细胞的制备方法(57)摘要提供一种转化细胞的制备方法，包括使含有目标分子的导入液和靶细胞接触，向所述靶细胞导入所述目标分子的导入步骤，所述导入步骤中，所述目标分子通过细胞内吞作用被导入所述靶细胞，通过导入所述目标分子而赋予、删除或维持性状后，制备在已建立的细胞中不残留从外部添加的载体等目标分子的转化细胞。CN112368372ACN112368372A权利要求书1/1页1.一种转化细胞的制备方法，包括使含有目标分子的导入液和靶细胞接触，向所述靶细胞导入所述目标分子的导入步骤，通过所述目标分子的导入，制备性状被赋予、删除或维持的转化细胞。2.如权利要求1所述的制备方法，所述目标分子选自核酸和蛋白质中的至少一种。3.如权利要求2所述的制备方法，所述核酸是载体。4.如权利要求3所述的制备方法，所述载体表达对细胞赋予、删除或维持性状的蛋白质。5.如权利要求2至4中任一项所述的制备方法，在所述转化细胞的80％以上的细胞中，所述核酸不插入染色体。6.如权利要求1至5中任一项所述的制备方法，在所述导入步骤中，所述目标分子通过细胞内吞作用被导入到所述靶细胞。7.如权利要求1至6中任一项所述的制备方法，在所述导入步骤中，通过对所述靶细胞进行沿面放电或等离子体照射，从而导入所述目标分子。8.如权利要求1至7中任一项所述的制备方法，包括在所述导入步骤后培养所述靶细胞的后培养步骤。9.如权利要求8所述的制备方法，在所述后培养步骤中，所述靶细胞的培养基包括能够杀灭细胞的选择分子。10.如权利要求1至9中任一项所述的制备方法，所述目标分子包含对选择分子具有耐性的选择标记分子。2CN112368372A说明书1/15页转化细胞的制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种转化细胞的制备方法。背景技术[0002]作为在细胞内导入核酸或蛋白质等目标分子的方法，已知有使用病毒的生物学方法、电穿孔或显微注射等物理学方法、脂质体等化学方法、使用等离子体的方法(专利文献1：日本特开2013-255475号公报)等。近年来，为了再生医疗或基因治疗等尖端医疗，在细胞或组织中导入目标分子，建立获得了新性状的细胞，并使用这些细胞进行治疗等。[0003]现有技术文献[0004]专利文献[0005]专利文献1：日本特开2013-255475号公报发明内容[0006]发明所要解决的课题[0007]但是，已知使用电穿孔导入目标分子时，在细胞膜上打开细孔，因此具有较高细胞毒性，另外，受损的染色体在修复过程中容易吸收目标分子。由于会产生细胞内残留的目标分子损害细胞自身保持的性状，引起免疫异常或细胞癌化等问题，因此成为再生医疗或基因治疗等尖端医疗的实用化的障碍。即使在一般作为目标分子导入方法的使用病毒的导入方法中，能够导入的细胞种类也有限制，导入的核酸或用于导入遗传基因的病毒载体有时会被整合到染色体中。[0008]因此，为了使采用例如inducedpluripotentstemcells(iPS细胞)等被赋予新的性状的细胞的再生医疗或细胞医疗这样的尖端医疗成为能够实用化的医疗技术，希望确立使用不残留外来基因的导入方法的iPS细胞或分化细胞等转化细胞的简便制备方法。[0009]因此，本发明的目的在于提供一种不残留从外部导入的目标分子的转化细胞的制备方法。[0010]用于解决课题的手段[0011][1]一种转化细胞的制备方法，包括使含有目标分子的导入液和靶细胞接触，向所述靶细胞导入所述目标分子的导入步骤，[0012]通过所述目标分子的导入，制备性状被赋予、删除或维持的转化细胞。[0013][2]如[1]中所述的制备方法，其中，目标分子选自核酸和蛋白质中的至少一种。[0014][3]如[2]中所述的制备方法，其中，核酸是载体。[0015][4