大蒜组织培养快繁技术的研究.docx

大蒜组织培养快繁技术的研究摘要：以贵州务川紫皮大蒜茎尖为试验材料将其接种在附加不同NAA和6-BA的MS分化培养基中比较组织诱导、分化和生根效果。试验结果表明以MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L培养基诱导愈伤组织效果最好；以MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基诱导不定芽增殖的效果较好增殖倍数达5倍；以MS+NAA0.4mg/L培养基的生根效果最佳。关键词：大蒜；茎尖；组织培养；快繁大蒜（AlliumsativumL.）为百合科葱属植物以鳞茎（蒜头）、蒜薹和幼株供食还可生产青蒜和蒜黄因其具有杀菌、防癌之功效成为群众喜爱的主要蔬菜之一且蒜薹为高档蔬菜颇受国内外市场欢迎[1]。大蒜生产中主要用鳞茎作繁殖材料不仅繁殖系数低而且生产成本高。同时在长期的无性繁殖过程中鳞茎易感染多种病毒造成大蒜种性退化使大蒜的产量和商品质量降低。而利用组织培养技术快速繁殖大蒜不仅可提纯复壮还可解决连年种植导致的种性退化等问题[23]。遵义务川紫皮大蒜为贵州优质大蒜品种但其在长期栽培过程中也存在种性退化的问题严重影响当地大蒜产业的发展。因此本试验旨在通过研究不同植物激素配比对大蒜愈伤组织的诱导、不定芽分化及生根的影响加快大蒜繁殖速度、提高繁殖率、增加繁殖倍数为进一步快繁务川大蒜提供依据。1材料与方法1.1试验材料贵州务川紫皮大蒜。1.2试验方法①外植体的选取和消毒选取完好的蒜瓣用蒸馏水冲洗数次后小心切开将其内的茎尖取出先用75%的酒精消毒30s再用0.1%的升汞消毒10min用无菌水冲洗5次小心切取0.2~0.5cm的茎尖待用。②愈伤组织的诱导将大蒜茎尖接种在附加不同浓度的6-BA（0.20.51.02.03.04.05.0mg/L）和NAA（0.20.5mg/L）组合（共14个处理）的MS培养基中每瓶接种3个茎尖每个处理10瓶接种30d后统计愈伤组织的诱导率。③不定芽的诱导将产生的愈伤组织切成1cm×1cm的小块并接种于附加不同浓度的6-BA（0.20.51.02.03.04.05.0mg/L）和NAA（0.10.5mg/L）组合（共14个处理）的MS培养基中进行不定芽的诱导。每瓶接种1块每个处理10瓶接种30d后统计诱导率。④根的诱导选取生长旺盛的再生芽从其基部与愈伤组织切离分别接种于附加不同浓度NAA（00.20.40.60.81.0mg/L）（6个处理）的MS培养基中生根。每瓶接种1个芽每个处理10瓶30d后统计生根情况。⑤培养条件将培养材料放在培养室内培养。培养室温度24~26℃光照强度2000~3000lx每天光照14~16h相对湿度为60%以上。2结果与分析2.1不同浓度6-BA和NAA组合对大蒜愈伤组织诱导率的影响由表1可知不同浓度的NAA和6-BA配比对大蒜茎尖愈伤组织的诱导效果不同。当6-BA浓度为2.0~3.0mg/L时添加0.5mg/LNAA的培养基比添加0.2mg/LNAA的培养基更有利于大蒜愈伤组织的诱导。而且当NAA浓度不变时愈伤组织的诱导率随着6-BA浓度的增加呈先升后降的趋势其中以附加6-BA3.0mg/L和NAA0.5mg/L的MS培养基上的大蒜愈伤组织长势最好为淡黄色诱导率最高达到76.7%是试验中最适合诱导大蒜愈伤组织的培养基。2.2不同浓度6-BA和NAA对大蒜不定芽诱导的影响从表2可以看出各处理培养基内的愈伤组织均能分化出不定芽。当NAA浓度不变时大蒜愈伤组织分化出的芽数随着6-BA浓度的增加呈先增后降的趋势且低浓度的NAA（0.1mg/L）对芽的诱导效果好于高浓度的NAA（0.5mg/L）。表明6-BA与NAA间的浓度比值较大时有利于芽的分化而其比值较小时不定芽分化受到抑制。其中附加6-BA2.0mg/L和NAA0.1mg/L的MS培养基的处理效果最好其增殖倍数达5倍不定芽苗的长势最好且较节约成本。试验发现6-BA浓度过高时会抑制不定芽的分化个别处理出现玻璃苗这与前人的研究结果一致[4]。2.3不同浓度NAA对大蒜不定芽苗生根的影响由表3可知在不添加NAA的MS培养基上大蒜不定芽诱导出根的概率较低且不定芽苗表现出根少、细弱、上部芽尖黄化等特征。而附加0.2~0.8mg/LNAA的MS培养基对大蒜不定芽苗的生根有不同程度的促进作用其中添加0.4mg/LNAA的MS培养基上的不定芽苗的生根率达到83.3%且根数多、较长、粗壮但随着NAA