他克莫司血药浓度方法学评论.docx

他克莫司血药浓度方法学评论他克莫司(tacrolimusFK506)是一种新型强效免疫抑制剂是链霉菌属中分离出来的发酵产物常温下呈白色结晶状粉末分子式为CH60N2HO分子量为822.05[1]。由于对T细胞有选择抑制作用主要用于抗器官排斥性疾病肝、肾移植的急性排斥反应或是免疫性疾病类风湿性关节炎、红斑狼疮等疾病药物本身和其代谢产物都具有一定的毒性所以进行血药浓度监测是其使用的一个必备前提。目前监控其血药浓度的方法有许多但是高效液相色谱法尚未成体系。本文采用反相高效液相色谱法测定他克莫司血药浓度[2]方法准确、可靠、简单适用于临床上监测他克莫司的血药浓度的广泛推广。2011年2月～2011年6月我们研究了使用反相高效液相色谱法测定他克莫司血药浓度的可行性。1材料与方法1.1材料仪器与药品仪器:3200Qtrap型液相色谱一串联质谱仪;药品:他克莫司胶囊(规格为1mg/粒浙江海正药业股份有限公司批号:20100412);他克莫司对照品(上海同田生物技术有限公司批号:084120L);乙腈为色谱纯其它试剂为分析纯。1.2方法1.2.1色谱条件:色谱柱:DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm×5μm);流动相:乙腈:0.2%磷酸:四氢呋喃(55:40:5);流速:1.2ml/min;柱温:30℃;进样量:20。1.2.2样品溶液的配制:精密称取他克莫司10mg全部转移至100ml容量瓶中加入乙腈至刻度摇匀制成0.1mg/ml的溶液放入冰箱保存。1.2.3标准溶液的配制:精密称取他克莫司对照品10mg全部转移至l00ml容量瓶中加入乙腈至刻度摇匀即得浓度为0.1mg/ml的标准品对照液。分别取标准品2、4、6、8、10ml用乙晴稀释至20ml做成标准曲线。1.2.4全血样品处理:取血清0.5ml加入5ml乙醚振荡3min3000r/min离心机处理10min将上清液转移至另一管中留待进样。1.2.5配制好的液体每次进样20μl每一浓度进样三次如结果无太大偏差取其平均值。以峰面积(A)对浓度(C)进行回归他克莫司的浓度在1.32~16.0μg/ml范围内线性关系良好。2结果2.1回收率取空白血浆1ml加入他克莫司标准液配成2.0、4.0、6.0三种梯度浓度的血浆样品按“1.2.4”项方法操作测定样品峰面积根据标准曲线计算相对回收率。根据各浓度血浆样品峰面积和相应浓度的标准液直接进样测得的峰面积比较通过计算得到绝对回收率。结果见表1。从表1可以看出:2.0、4.0、6.0(μg/ml)三种梯度浓度的血浆样品相对回收率分别为104.1%、102.7%、102.8%;绝对回收率分别为93.8%、95.5%、93.0%。平均相对回收率为103.2%平均绝对回收率为94.1%。研究结果显示:反相高效液相色谱法能够较好测定他克莫司血药不同浓度的相对和绝对回收率。2.2精密度配制2.0、4.0、6.0三种浓度的血浆样品在同1d的不同时间和5d中每一天按“1.2.4”项方法操作测定样品峰面积得出日内和日间精密度见表2。从表2可以看出:.0、4.0、6.0(μg/ml)三种梯度浓度的血浆样品日内精密度分别为104.1%、102.7%、102.8%;日间精密度分别为93.8%、95.5%、93.0%。平均日内精密度为103.2%平均日间精密度为94.1%。研究结果显示:反相高效液相色谱法能够较好测定他克莫司血药不同浓度的日内和日间精密度。3讨论作为第二代免疫抑制药的代表性药物他克莫司临床大量应用于肝肾等器官移埴的抗排斥反应及免疫缺陷性疾病具有药效强、剂量低、提高器官存活率、急性排斥反应低等优点。但是他克莫司治疗范围限制在一定的剂量毒副作用较大关键是毒副作用与血药浓度呈量效正相关性再加上其药动学指标患者个体差异较大无法用服药量来判断血药浓度的范围[3]。因此临床使用他克莫司治疗病症时为提高免疫抑制效果的同时将不良反应的发生率降到最低需要监测药物在休内的血药浓度根据测量到的血药浓度来确定给药剂量和方案。检测他克莫司血药浓度时通常采用全血来做为检测标本这是因为:①全血/血浆中他克莫司浓度的分布为20:1全血中药物浓度较高更易达到检测灵敏度要求;②血浆浓度稳定性关比全血浓度变异性大;③他克莫司血药浓度监测为全血谷值浓度所以一般不用血浆。而且患者个体差异较大血药达峰时间并不一致所以临床检测一般以全血为主[45]。有研究表明许多因素能影响他克莫司的血药浓度[6～8]例如性别女性的血药浓度要高于男性体重和身高也对他克莫司的血药浓度有影响给药时间也对他克莫司的血药