一种高活性啤酒复合酶及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113980944A(43)申请公布日2022.01.28(21)申请号202111607029.2(22)申请日2021.12.27(71)申请人中知国创生物技术（山东）有限公司地址264006山东省烟台市开发区长江路300号A栋孵化器808室(72)发明人刘苹张毅单守水孙胜男于飞(74)专利代理机构烟台上禾知识产权代理事务所(普通合伙)37234代理人申玉娟(51)Int.Cl.C12N9/50(2006.01)C12N9/24(2006.01)C12C7/04(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种高活性啤酒复合酶及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种高活性啤酒复合酶的生产方法，包括步骤：（1）将生麦芽粉与水混合浸提；（2）将浸提液使用截留分子量为50000Da~60000Da的超滤膜进行超滤浓缩；（3）将步骤（2）获得的膜上物升温，除去热凝物，得一级膜上物酶液；（4）将步骤（2）获得的膜下物经过截留分子量为10000Da~20000Da的超滤膜，取膜上物，得二级膜上物酶液；（5）将一级膜上物酶液和二级膜上物酶液按照蛋白酶与极限糊精酶的酶活比（15~30）：1混合。本发明还公开了上述方法获得的啤酒复合酶及其在啤酒制备中的应用。该啤酒复合酶完全吻合啤酒酿造要求，克服因麦芽糖化力不足，外加微生物发酵酶制剂的缺陷。CN113980944ACN113980944A权利要求书1/1页1.一种高活性啤酒复合酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）低温浸提：将生麦芽粉与水混合，搅拌均匀后，维持在10~25℃进行浸提1~2h；（2）一级超滤：将浸提所得的酶液使用截留分子量为50000~60000Da的超滤膜进行超滤浓缩，取膜上物和膜下物；（3）换热：将步骤（2）获得的膜上物升温至30~40℃，保温维持0.5~1h，除去酶液中的热凝物，得一级膜上物酶液；（4）二级超滤：将步骤（2）获得的膜下物经过截留分子量为10000~20000Da的超滤膜进行超滤浓缩，取膜上物，得二级膜上物酶液；（5）调配：将一级膜上物酶液和二级膜上物酶液按照蛋白酶与极限糊精酶的酶活比（15~30）：1混合，获得高活性啤酒复合酶。2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（5）调配之前，分别向一级膜上物酶液与和二级膜上物酶液中添加以其质量计8wt%~15wt%的氯化钠，20wt%~30wt%的山梨醇，0.05wt%~0.3wt%的苯甲酸钠，0.05wt%~0.1wt%的尼泊金甲酯钠进行稳定性处理。3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（1）中，麦芽粉与水的质量比为1：（35）。~4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（1）低温浸提后，向浸提体系中加入硅藻土，搅拌均匀，并过滤，获得清澈的酶液。5.根据权利要求4所述的生产方法，其特征在于，向步骤（1）获得的浸提体系中添加以其质量计1wt%~6wt%的300#硅藻土，以及0.3wt%~2wt%的10#硅藻土。6.根据权利要求4所述的生产方法，其特征在于，使用板框过滤机进行过滤，并用水冲洗板框，并收集清洗液，与过滤获得的酶液混合。7.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，将步骤（3）换热后获得的酶液添加硅藻土精滤，得澄清酶液。8.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述的麦芽为大麦芽。9.一种高活性啤酒复合酶，使用如权利要求1~8任一项所述的生产方法获得。10.一种如权利要求9所述的高活性啤酒复合酶在啤酒生产中的应用。2CN113980944A说明书1/4页一种高活性啤酒复合酶及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物酶制剂领域，具体涉及一种高活性啤酒复合酶及其制备方法和应用。背景技术[0002]啤酒酿造主要是以麦芽（即大麦或小麦经过发芽、干燥、焙烤的制品）为主要原料，并通过麦芽自身含有的酶活对碳水化合物、蛋白质等进行水解制备麦芽汁，再经过啤酒发酵获得。但为防止生麦芽（即大麦或小麦发芽、低温干燥、没有高温焙烤）带来饮用时的“生青味”、增加啤酒麦芽的“烤香味”，需要对发芽后的麦芽在80℃~100℃焙烤，致使大麦或小麦在发芽过程中产生的酶大多数因受高温而失活，酶得不到充分利用，导致以下三个问题：一是麦芽汁制备时酶活力不足，致麦芽原料利用率下降，尤其是麦芽中的蛋白质利用率只有20%左右，大部分蛋白质在加热过程中发生沉淀被过滤掉；二是麦芽中含有一种β‑葡聚糖，尤其是品质较差的麦芽含量更高，β‑葡聚糖会与蛋白结合形成沉淀，引发酵母过早沉淀，影响发酵和双乙酰的还原，并且还会导致啤酒成品质量不稳定，容易产生非生物性浑浊；三是影响辅料的用量和得率：目前麦芽汁制备时添加30%以上