增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114438125A(43)申请公布日2022.05.06(21)申请号202210135752.3(22)申请日2022.02.15(71)申请人陕西脉元生物科技有限公司地址710311陕西省西安市高新区草堂科技产业基地秦岭大道西2号科技企业加速器园区1期八号楼1-3-2.1-2-2(72)发明人闫亚平赵子越郝文斌陈倩文刘龙月李科(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师苏士莹(51)Int.Cl.C12N15/85(2006.01)G01N33/564(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表13页附图4页(54)发明名称增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用(57)摘要本发明属于生物技术领域，具体涉及增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用。本发明利用共表达LGI1和ADAM22；或共表达LGI1和ADAM23的方式增强LGI1免疫荧光，所述ADAM22蛋白或ADAM23蛋白可以促使细胞内LGI1驻留在细胞膜上，并且捕获细胞外的LGI1，能够增强LGI1免疫荧光信号，只需微量的ADAM22或ADAM23质粒即可检测出LGI1信号，解决免疫荧光检测血清中LGI1自身抗体信号差的问题。CN114438125ACN114438125A权利要求书1/1页1.一种增强LGI1免疫荧光的方法，其特征在于，包括如下步骤：共表达LGI1和ADAM22；或共表达LGI1和ADAM23。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LGI1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；所述ADAM22的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；所述ADAM23的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示。3.一种LGI1的免疫荧光检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将编码LGI1的DNA片段插入至表达载体，提取质粒得到LGI1重组表达质粒；将编码ADAM22的DNA片段插入至表达载体，提取质粒得到ADAM22重组表达质粒；或者将编码ADAM23的DNA片段插入至表达载体，提取质粒得到ADAM23重组表达质粒；将所述LGI1重组表达质粒和所述ADAM22重组表达质粒同时转染入细胞中，细胞培养后进行免疫荧光染色；或者将所述LGI1重组表达质粒和所述ADAM23重组表达质粒同时转染入细胞中，细胞培养后进行免疫荧光染色。4.根据权利要求3所述的免疫荧光检测方法，其特征在于，所述转染时，所述ADAM23重组表达质粒和所述LGI1重组表达质粒的质量比为1:1～599；所述ADAM22重组表达质粒和所述LGI1重组表达质粒的质量比为1:1～599。5.根据权利要求3所述的免疫荧光检测方法，其特征在于，所述表达载体包括真核载体。6.根据权利要求3所述的免疫荧光检测方法，其特征在于，所述细胞培养的温度为37℃，时间为48h。7.根据权利要求3所述的免疫荧光检测方法，其特征在于，所述编码LGI1的DNA片段、编码ADAM22的DNA片段和编码ADAM23的DNA片段分别通过PCR扩增方法获得。8.根据权利要求3～7任一项所述的免疫荧光检测方法，其特征在于，所述转染包括PEI转染、lipofectamin2000转染、lipofectamin3000转染或电转。9.根据权利要求8所述的免疫荧光检测方法，其特征在于，所述PEI和所述LGI1重组表达质粒的体积质量比为1:2～4。10.权利要求3～7任一项所述的免疫荧光检测方法在检测LGI1自身抗体中的应用。2CN114438125A说明书1/9页增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用。背景技术[0002]LGI1(富亮氨酸胶质瘤失活基因1)是一种存在于中枢神经系统的分泌型蛋白质，是电压门控钾通道(Voltage‑gatedpotassiumChannelVGKC)复合物的一种特定成分，在新皮层和海马体中高表达。该蛋白功能受损会影响突触蛋白的连接，同时减少了相关受体介导的突触传递。[0003]LGI1抗体脑炎是一种以癫痫发作、低钠血症及认知功能障碍为主要临床表现的自身免疫性脑炎，常发病于50岁至70岁之间的中老年人之间。男性发病率及年龄高于女性，约占60％～70％。检测LGI1抗体是诊断LGI1抗体脑炎的特征性指标，常用的方法包括免疫组织化学法、免疫荧光、免疫胶体金、酶联免疫吸附(ELISA)等等。免疫荧光法因其简单快捷、结果直观被广泛应用于自身抗体的检测。然而，由于LGI1是分泌型蛋白，在过