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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114469852A(43)申请公布日2022.05.13(21)申请号202210152536.XA61K47/36(2006.01)(22)申请日2022.02.18A61P1/00(2006.01)C12Q1/06(2006.01)(71)申请人厦门承葛生物科技有限公司C12Q1/6869(2018.01)地址361000福建省厦门市火炬高新区(翔安)产业区翔星路88号台湾科技企业育成中心W605A室(72)发明人肖传兴李源涛谭文章陈章然林檀林昊张程张帮周崔玲玲(74)专利代理机构南昌金轩知识产权代理有限公司36129专利代理师殷康明(51)Int.Cl.A61K9/06(2006.01)A61K35/741(2015.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法(57)摘要本发明提供一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,本制备方法制备出的菌群凝胶剂较于菌液具有黏稠度高、易制备、便于存储的优势。试验表明,在‑20℃条件下保存30天稳定性较好,菌群丰度变化不大。特别是对于菌群移植临床治疗中的一些特殊患者,可以作为一种提高肠道内菌群停留时间的剂型进行推广使用,提高治疗的效果。CN114469852ACN114469852A权利要求书1/1页1.一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤S00菌群制备:收集健康供体新鲜粪便x份,按稀释比例溶解于y份的生理盐水中,再通过粪便分析前处理仪处理去除残渣,得到菌悬液D;步骤S10凝胶基质制备:将海藻酸钠按照3%的添加量置于开水中使用电动搅拌机1600rpm搅拌30min至完全溶解,再加入营养底物继续搅拌10min至所有试剂完全溶解,后于高压灭菌锅121℃灭菌20min,得到凝胶基质E并冷却待用;步骤S20凝胶剂制备:将步骤S00中得到的菌悬液D和步骤S10中得到的凝胶基质E按照质量比为5:1的比例混合,通过漩涡震荡仪搅拌均匀得到菌群凝胶剂F;步骤S30产品获取:将步骤S20中得到的菌群凝胶剂F置于‑20℃的冰箱中进行储存。2.根据权利要求1所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,其特征在于:还包括步骤S11:将步骤S10中冷却得到的凝胶基质E取样并观察性状,所需观察的性状包括粘度以及流动性。3.根据权利要求1所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,其特征在于:在步骤S10中所加入的营养底物包括:5%的葡萄糖、0.02%的维生素C和0.5%的山梨糖醇。4.根据权利要求1所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,其特征在于:还包括步骤S21凝胶剂检测:将步骤S20中得到的菌群凝胶剂F取样多份至不同的容器内,进行初始活菌率的测定。5.根据权利要求4所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,其特征在于:在步骤S21中,在对初始活菌率进行测定时,先将取样的菌群凝胶剂F稀释若干倍,用LIVE/DEADTMBacLightTMBacterialViabilityKit染料对样本中的微生物进行染色,使用BDAccuriC6流式细胞仪进行观察并计数,使用BDAccuriTMC6PlusSoftware软件分析样本的初始单位菌量和初始单位存活菌量。6.根据权利要求1所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,其特征在于:还包括步骤S31:将步骤S30中获取的产品于‑20℃储存若干天后取样,于37℃的水浴锅中融化,稀释若干倍,通过流式细胞仪检测分析单位菌量和菌群活性。7.根据权利要求6所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,其特征在于:在步骤S31中菌群凝胶剂F取样所保存的天数分别为7天、14天以及30天。8.根据权利要求6所述一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法,其特征在于:在步骤S31中同时使用QIAampFastDNAStoolMiniKIT(QIAGEN)试剂盒提取菌群凝胶剂样本的DNA,基于16SrRNAV3‑V4区段进行PCR文库构建,通过IlluminaHiSeq2500仪器进行高通量测序,借助生信分析平台通过Usearch进行OTU聚类分析以获得菌群丰度和组成信息。2CN114469852A说明书1/4页一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法技术领域[0001]本发明涉及菌群移植技术领域,尤其涉及一种用于菌群移植的肠道菌群凝胶剂制备方法。背景技术[0002]人体消化道内生存着约10万亿个微生物,包含1000多种细菌,它们在宿主体内发挥着重要功能,例如阻止病原体入侵,促进消化和营养吸收,合成维生素和激活免疫系统等。另外,肠道和中枢神经通过释放信号分子进行密切的交流互作,因此肠道微生物也具有影响我们大脑发育和行为的潜