一种倏逝波光纤探针及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114518346A(43)申请公布日2022.05.20(21)申请号202210107681.6G01N33/68(2006.01)(22)申请日2022.01.28G02B6/02(2006.01)(71)申请人淮阴工学院地址223003江苏省淮安市经济技术开发区枚乘东路1号(72)发明人吴兵魏言春刘磊李江平段鹏潘长江柳森权莉杨忠美(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204专利代理师王艳(51)Int.Cl.G01N21/64(2006.01)G01N33/536(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种倏逝波光纤探针及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种倏逝波光纤探针及其制备方法和应用，该光纤探针是一种偶联抗体分子的倏逝波生物分子光纤传感探针，采用光纤构建检测探针，利用光纤及抗体、抗原结合原理识别分离被检测分子，并通过光纤倏逝波激发光点击分子，最后用荧光定量，获得被检测分子的数量信息。避免了生物分子检测过程中的标记过程以及分子的分离操做，又保留了荧光检测的高灵敏度特征，提高及了检测的快捷性和灵敏度。本发明的可以实现对各种生物标志性分子的快速、直接测量，并且光点击时间和功率可根据检测需求灵活调节，能适用于生物分子、病菌和病毒等的鉴别和定量检测，应用范围广泛。CN114518346ACN114518346A权利要求书1/1页1.一种倏逝波光纤探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将石英光纤一端的保护层和外包层去除干净，用沸腾的Piranha溶液浸泡使光纤芯羟基化，用水清洗，用氮气吹干，得到羟基化光纤；（2）将羟基化光纤放入3‑氨基‑三甲氧基硅烷甲醇溶液中进行硅烷化反应，将反应后光纤清洗吹干，用甲醇清洗后再用水冲洗，用氮气吹干，得到硅烷化光纤；（3）将硅烷化光纤浸入到戊二醛水溶液中进行反应，用水清洗，用氮气吹干，将羧基氨基聚乙二醇和醛基反应得到羧基氨基饰性聚乙二醇，将羧基氨基饰性聚乙二醇共价连接到硅烷化光纤上，得到羧基化光纤；（4）将羧基化光纤用EDC/NHS活化后置于抗体分子溶液中，摇床孵育过夜，用水清洗，得到偶联抗体的倏逝波光纤探针。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述石英光纤的芯径为100‑400μm，Piranha溶液为3~6:1的浓硫酸和双氧水的混合溶液，所述浸泡时间为20‑30min。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述3‑氨基‑三甲氧基硅烷甲醇溶液的浓度为510%，所述戊二醛水溶液浓度为2.55%，所述硅烷化反应时间为12~~~24h。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述羧基氨基聚乙二醇的分子量为500‑2000Da。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述的抗体分子为金黄色葡萄球菌蛋白A溶液，所述抗体分子溶液的浓度为5~20μM。6.一种利用权利要求1‑5任一项所述制备方法得到的倏逝波光纤探针。7.权利要求6所述倏逝波光纤探针在检测生物分子中的应用。8.一种权利要求6所述倏逝波光纤探针定量检测生物分子的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将待测生物分子样品滴入权利要求6所述的倏逝波光纤探针上孵育，用水清洗倏逝波光纤探针得到结合了待测生物分子的光纤探针；（2）将光点击分子溶液滴至检测皿中，将结合了待测生物分子的光纤探针插至检测皿中，光纤头穿过底部微孔，埋入橡胶垫中，光纤探头全部没入光点击分子溶液；（3）将激光导入光纤进行光点击反应，然后抽出光纤探针；（4）检测步骤（3）反应后的溶液的荧光强度，根据测得的荧光强度与标准强度曲线对比，利用插值法定量待测生物分子的浓度。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述孵育时间为30‑60min，步骤（2）中，所述光点击分子为带有叠氮‑炔烃或四氮唑‑烯烃环化加成反应基团的荧光响应型化合物。10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，所述光点击反应时间为5‑30min。2CN114518346A说明书1/5页一种倏逝波光纤探针及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及一种倏逝波光纤探针及其制备方法和应用，属于生物分子及病毒等识别检测的技术领域。背景技术[0002]生物医学中，疾病检测、病毒识别、细胞病毒鉴别等，常常需要对标志性生物分子进行精确的检测。当前生物分子检测的难点在于生物分子的精确识别以及高灵敏度检测的实现，光学识别系统具有很大的优势而被选择。光学生物分子识别检测系统通常包括分子识别单元和转换单元两部分。最常用的方法是首先利用分子配体受体特异性的相互