反相高效液相色谱法测醇提姜黄素含量.docx

反相高效液相色谱法测醇提姜黄素含量摘要：姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素具有抗炎、抗氧化等药理作用。本实验采用高效液相色谱法对醇提姜黄素中的姜黄素的进行了含量测定。方法：采用C18色谱柱甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）为流动相检测波长为425nm流速为1.0ml/min。姜黄素在5～400μg・mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.99995）。姜黄素平均回收率分别为99.6%。结论：本法简便、准确可用于醇提姜黄素中姜黄素的含量测定。关键词：醇提姜黄素；含量；测定姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素具有抗炎、抗氧化等药理作用。姜黄素的测定方法主要有高效液相色谱法、薄层扫描法、分光光度法、库仑滴定法等[1-5]。高效液相色谱法以液体为流动相采用高压输液系统将具有不同极性的流动相泵入装有固定相的色谱柱在柱内各成分被分离后从而实现对试样的分析。本实验采用高效液相色谱法对醇提姜黄素中的姜黄素的进行了含量测定。1仪器与试药1.1仪器：Milli-QIntegral纯水超纯水一体化智能系统（精艺兴业科技有限公司）；JWC-52B1精密恒温槽（上海思尔达科学仪器有限公司）；FL2200-2四元低压梯度液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司）；721可见分光光度计（上海楚定分析仪器有限公司）；BXXW-30AD博翔兴旺双频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）；FA2004J电子密度分析天平（上海维菱科学仪器有限公司）。1.2色谱柱：迪马C18钻石色谱柱（220mm×4.6mm5μm）。1.3对照品：姜黄素1.4试剂：甲醇（永华化学科技（江苏）有限公司）、醋酸（永华化学科技（江苏）有限公司）、冰醋酸（东莞市乔科化学有限公司）、乙腈（永华化学科技（江苏）有限公司）、磷酸（东莞市乔科化学有限公司）、草酸（东莞市乔科化学有限公司）、氢氧化钠（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、磷酸二氢钠（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）。2测定方法确定2.1色谱条件依据查阅文献及考查的结果确定色谱条件如下。流动相：甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）为流动相检测波长：425nm流速：1.0m・min-1。柱温：30℃。理论板数按姜黄素峰计算应不得低于2000。2.2对照品溶液的制备精密称取姜黄素对照品适量置容量瓶中加流动相制成每1mL含40μg的溶液即得。2.3供试品溶液的制备取供试品适量精密称定置具塞锥形瓶中精密加入流动相10mL密塞精密称定重量超声处理5分钟放冷精密称定用流动相补足重量摇匀滤过。取续滤液即得。2.4专属性试验取乙醇、甲醇、醋酸等试验用试剂照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液依上述方法测定结果在姜黄素出峰处阴性液无色谱峰结果阴性试验没有干扰表明本方法专属性良好。2.5精密度试验精密称取姜黄素对照品适量加流动相使溶解制成浓度为40μg・mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件精密吸取10μl连续进样6次记录峰面积。结果RSD=0.63%表明本方法精密度良好。2.6对照品的线性考察精密称取适量姜黄素对照品加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL注人液相色谱仪依照2.1项下的色谱条件测定记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标对照品进样量（X）为横坐标绘制标准曲线。结果表明姜黄素在5～400μg・mL-1范围内呈良好的线性关系。2.7重现性试验称取同一批的醇提姜黄素样品6份按测定方法项下的方法制备供试品溶液测定含量并计算样品的RSD值结果RSD为0.62%结果表明此方法的重现性良好。2.8准确度试验精密称取已知含量的样品9份分别精密加入姜黄素对照品按项下方法制备成120%140%、160%。取模拟样品照试验方法试验计算回收率为99.6%RSD为0.53%。2.9样品稳定性试验取同一批醇提姜黄素样品按2.3项下的供试品制备方法制备供试品将供试品置室温下放置分别于第0、1、2、3、4、5小时精密吸取供试品溶液10？滋l注入液相色谱仪中记录色谱图。测定醇提姜黄素中姜黄素的RSD=0.76%。结果表明供试品5小时内稳定。2.10样品含量测定依照上述含量测定方法测定醇提姜黄素三批样品中姜黄素的含量结果三批样品的含量分别为35μg・mL-1、32μg・mL-1、36μg・mL-1。