反相高效液相色谱法同时测定来曲唑含量及有关物质.docx

反相高效液相色谱法同时测定来曲唑含量及有关物质摘要目的：采用反相高效液相色谱法同时测定来曲唑含量及有关物质。方法：使用Agilent1100型高效液相色谱仪和ZORBAXXDB-C18色谱柱(150×4.6mm5μm)在流动相为水：乙腈=60：40、流速为1.0mL／min、紫外检测波长为230n／n的条件下测定来曲唑含量及有关物质。结果：来曲唑含量测定的线性范围为2～100μg／mL相关系数为0.99996。日内和日间精密度均良好(RSD关键词来曲唑有关物质RP-HPLC含量测定中图分类号：TQ460.72；O657.72文献标识码：A文章编号：1006-1533(2010)03-0136-02来曲唑(letrozole)是Novartis公司开发上市的一种非甾体类芳香酶抑制剂主要用于治疗晚期乳腺癌。在美国药典(USP)27版中来曲唑含量和有关物质测定均采用高效液相色谱法(HPLC)梯度洗脱法。但在国内来曲唑含量测定采用容量滴定法而有关物质测定采用HPLC法。笔者在实际工作中经对上述两种方法进行比较建立了更为简便的HPLC方法可以同时进行来曲唑含量及有关物质的测定。经方法学验证证实此方法简单、灵敏专属性强定量结果准确。1仪器与试药1.1仪器Agilent1100型高效液相色谱仪包括G1314AVWD检测器、G1315BDAD检测器、G1311A型四元泵、G1329A型自动进样器、G1316A型柱温箱和G1322A型脱气机。1.2试药来曲唑对照品(USPreferencestandardCATNO：35697；LOT：FOB170；USPROCKVILLEMD)来曲唑杂质对照品(USPreferencestandardCATNO：1356982：LOT：GOD298；USPROCKVILLEMD)来曲唑(本公司研制样品)及各中间体(本公司研制)乙腈(色谱纯)和水(超纯水)。2方法与结果21色谱条件色谱柱：C18(ZORBAXEclipseXDB-C18150×4.6mm5μm)；流动相：乙腈：水--40：60；检测波长：230nm；流速：1.0mL／min；进样量：20μL；稀释剂：流动相。2.2波长的选择根据来曲唑与各杂质及中间体在DAD上的光谱扫描可以看出来曲唑及其杂质在230～240nm有较大吸收而苄唑在240nm处的吸收较小且对氟苯腈在240nm处几乎没有吸收。考虑以上杂质(即中间体)因素选定波长为230nm。2.3专属性试验分别取来曲唑对照品、来曲唑杂质及各中间体适量用溶剂溶解、稀释制取每毫升含0.01mg的溶液进行定位。另取来曲唑对照品、来曲唑杂质及各中间体配制成含来曲唑8μg／mL及含其它各组分4μg／mL的溶液作为专属性试验用溶液。进样测定结果显示主成分峰不脱尾理论塔板数大于5000且能与4个中间体和杂质完全分离各峰之间的分离度均大于1.5各组分出峰时间均在主成分峰保留时间2.5倍以内溶剂对测定无干扰证明本色谱系统的专属性良好。此外再分别取来曲唑精制品适量分别用2％过氧化氢溶液、1mol／L盐酸溶液和1mol／L氢氧化钠溶液充分浸润后放置24h在60℃下烘干；另取来曲唑精制品适量在紫外灯下照射36h进行破坏试验。测定结果显示本色谱条件可以将各破坏条件下的降解产物与主成分完全分离由此进一步证明本色谱系统的专属性良好。2.4最低检测限取来曲唑样品适量用流动相溶解并稀释配置成一定浓度的溶液进行测定测得其最低检测限为0.2ng。2.5线性范围取来曲唑样品20mg至100mL容量瓶中用稀释剂溶解摇匀精密量取1、3、5、7、10、15、25、35、50mL分别置于100mL棕色量瓶中用稀释剂定容摇匀。取上述溶液在选定的色谱条件下进样20μL记录色谱图根据峰面积计算测得数据经线性回归得回归方程：y=113.91x+24.396r=0.99996说明来曲唑在2～100μg／mL浓度范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系。2.6精密度和稳定性试验精密吸取来曲唑样品溶液(浓度为10μg／mL)20μL注入液相色谱仪重复进样5次记录色谱图发现来曲唑样品峰的RSD值为0.04％。连续测定3d日间精密度RSD为0.24％。另外在第0、第2、第4、第8、第16和第24h分别取10μg／mL的来曲唑样品溶液20μL注入液相色谱仪。记录色谱图结果见峰面积基本没有变化RSD为0.22(N=6)表明样品溶液在24h内稳定性良好。2.7有关物质测定取来曲唑样品